免疫印迹
什么是蛋白印迹法?
蛋白质印迹是一种常用的蛋白检测和定量的技术。它可以从复杂的蛋白混合物(例如细胞裂解物)中分离和检测某种特定的目标蛋白。蛋白印迹法可应用于诊断、生物技术、分子生物学、蛋白质组学等,且在评估细胞中的蛋白表达水平以及大小和其他属性的变化时均广泛依赖于这种方法。
蛋白印迹法
根据使用的二抗,有几种蛋白印迹法可供考虑,靶蛋白检测可以使用比色法、化学发光法或荧光法。这些方法的描述如下,且需要不同的检测设备。例如,可使用 X 射线胶片或数字成像设备检测化学荧光,而荧光二抗则需要使用荧光成像仪进行检测。每一种方法都有各自的优缺点,需要在选择方法时酌情考虑。
我们介绍过的另一种方法 ScanLater™ 蛋白印迹检测系统首次在多功能微孔板读板机平台中实现蛋白印迹检测。利用这种无底物的检测,研究人员可获得与传统化学发光检测相当的灵敏度,同时将蛋白印迹、ELISA 和其他应用结合在一台读板机上。我们以下的精选应用说明提供进一步的详细信息。
蛋白印迹检测工作流程
这是进行典型蛋白印迹检测的步骤:
1. 执行电泳:首先使用凝胶电泳按大小分离蛋白质。
2. 转移:蛋白质随后被转移至通常由硝酸纤维素或聚偏二氟乙烯 (PVDF) 制成的印迹膜上,然后使用对目标蛋白质具有特异性的一抗进行探针检测。
3. 用封闭缓冲液封闭:这可防止一抗(下一步)和膜本身结合。
4. 用一抗培养:一抗与靶蛋白质结合。
5. 用洗涤缓冲液清洗:清洗掉未结合的一抗。
6. 用二抗培养:添加可识别并结合一抗的二抗。该二抗与酶或其他能够检测目标蛋白质的材料结合,目标蛋白质在印迹上显示为一个条带。
7. 用洗涤缓冲液清洗:清洗掉未结合的二抗。
8. 使用选择的方法/化学过程进行检测:根据使用的二抗,可通过比色法、荧光法或发光法检测靶蛋白质。