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什么是蛋白印迹法?

蛋白印迹法是一种普遍的用于蛋白检测和定量的技术。它可以从复杂的蛋白混合物(例如细胞裂解物)中分离和检测某种特定的目标蛋白。蛋白印迹法可应用于诊断、生物技术、分子生物学、蛋白质组学等,且在评估细胞中的蛋白表达水平以及大小和其他属性的变化时均广泛依赖于这种方法。

 

蛋白印迹法

根据使用的二抗,有几种蛋白印迹法可供考虑,靶蛋白检测可以使用比色法、化学发光法或荧光法。这些方法的描述如下,且需要不同的检测设备。例如,可使用 X 射线胶片或数字成像设备检测化学发光,而荧光二抗则需要使用荧光成像仪进行检测。每一种方法都有各自的优缺点,需要在选择方法时酌情考虑。

我们介绍过的另一种方法 ScanLater™ 蛋白印迹检测系统首次在多功能微孔板读板机平台中实现蛋白印迹检测。利用这种无底物的检测,研究人员可获得与传统化学发光检测相当的灵敏度,同时将蛋白印迹、ELISA 和其他应用结合在一台读板机上。我们以下的精选应用说明提供进一步的详细信息。

ScanLater Western Blot检测卡盒

ScanLater™ 蛋白印迹检测系统可以在微孔板读板机上进行蛋白印迹检测

 

蛋白印迹检测工作流程

这是进行典型蛋白印迹检测的步骤:

蛋白印迹检测工作流程

 

1. 电泳 – 首先使用凝胶电泳按大小分离蛋白。


2. 转移 – 蛋白随后被转移至通常由硝酸纤维素或 PVDF 制成的印迹膜上,然后使用对目标蛋白具有特异性的一抗进行探针检测。


3. 用封闭缓冲液封闭这可防止一抗(下一步)和膜本身结合。


4. 一抗孵育一抗与靶蛋白结合。

5. 用洗涤缓冲液清洗清洗掉未结合的一抗。


6. 二抗孵育添加一种能识别和结合一抗的二抗。这种二抗可偶联能检测目标蛋白的酶或其他物质,目标蛋白在印迹上以条带显示。


7. 用洗涤缓冲液清洗 – 清洗掉未结合的二抗。


8. 使用选择的方法/化学过程进行检测 – 根据使用的二抗,可通过比色法、荧光法或发光法检测靶蛋白。

 

 

  • 比色蛋白印迹法

    比色蛋白印迹法

    比色蛋白印迹法使用酶联二抗和一种显色底物进行检测。

    优点:

    • 无需特殊设备

    缺点:

    • 灵敏度有限(pg 范围)
    • 印迹可剥离和重新进行探针检测,以研究额外的靶标

    化学发光蛋白印迹法

    化学发光蛋白印迹法

    化学发光蛋白印迹法使用一种偶联酶的二抗和一种发光底物。使用 X 射线胶片和暗室设备或一个数字成像系统来检测结果。

    优点:

    • 灵敏度(fg 水平)
    • 印迹可剥离和重新进行探针检测

    缺点:

    • 结果可能是非线性的
    • 信号的寿命很短
    • 检测所需的设备可能很贵且占空间

  • 荧光蛋白印迹法

    荧光蛋白印迹法

    荧光蛋白印迹法使用一种偶联荧光团的二抗,因此无需底物。需要使用荧光成像仪来检测结果。

    优点:

    • 与比色法或发光法相比,动态范围更大、线性更佳
    • 可使用不同的荧光团进行多路传输

    缺点:

    • 灵敏度比化学发光法低
    • 需要一个专用的荧光成像系统

    ScanLater 免疫印迹检测系统

    ScanLater 免疫印迹检测系统

    借助 ScanLater 蛋白印迹检测系统,二抗偶联时间分辨荧光基团,结合荧光法和化学发光法的优点。

    • 检测无需底物
    • 信号在数月或更长时间内保持稳定
    • 灵敏度保持在ng以下的水平
    • 宽动态范围

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  • 通过 ScanLater 免疫印迹检测系统检测和定量蛋白质

    蛋白检测 ScanLater 蛋白印迹检测

    蛋白质检测对于当今的制药和临床研究非常重要,而免疫印迹检测则是一种最常见的蛋白检测方法。可使用多种技术来检测免疫印迹膜上的蛋白,如荧光和化学荧光。但每种技术都有其局限性,而且始终需要提高定量的准确性和动态范围。

    该应用说明显示,由于背景降低、检测随时间保持稳定以及读数的数量,动态范围扩大。此外,Scanlater 蛋白印迹系统和化学发光法的比较表明,灵敏度增强。

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    使用成像和蛋白印迹检测来验证 CRISPR 编辑的细胞

    使用成像和蛋白印迹检测来验证 CRISPR 细胞

    基因编辑已被广泛用于研究基因表达和蛋白功能,但其中许多方法还需大量劳力而且并不准确1。CRISPR(成簇的规律间隔的短回文重复序列 )/Cas9 系统由于其高准确性和易用性,已成为一种受欢迎的基因编辑工具2。

    我们在此论证了 SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机和 ScanLater 蛋白印迹检测系统如何能用于验证 CRISPR/Cas9 基因组编辑。

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  • Western 法板孔分析:细胞热休克反应研究

    Western 法板孔分析:细胞热休克反应

    研究细胞反应时可采用多种方式来收集信息 — 成像、细胞活性和增殖检测、查看蛋白表达变化的蛋白印迹法等。通常需要使用多个仪器平台来收集必要结果,在这个过程中可能需要了解几个软件包。

    在该应用说明中,我们展示了如何使用单一仪器 SpectraMax® i3 多功能检测平台来收集多个相关细胞参数的数据。

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    通过 ScanLater 蛋白质印迹蛋白Ladder估计蛋白分子量

    估算蛋白分子量

    ScanLater™ 蛋白印迹蛋白Ladder是 ScanLater™ 蛋白印迹检测系统的一个主要组成部分。此蛋白Ladder的主要应用包括估算蛋白分子量、可视化凝胶电泳以及评估从凝胶到印迹的转移过程。

    了解用户如何遵循已针对其应用优化的电泳和印迹工作流程。

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  • 基于铕标记蛋白的蛋白检测

    铕标记蛋白的蛋白检测

    使用酶标仪(读板机)进行基于铕元素标记的 Western Blot 蛋白检测和定量

    这里我们展示了 SpectraMax® 多功能微孔板读板机中用于蛋白印迹分析的一种新型系统。使用铕标记二抗或标记有目标蛋白的链霉亲和素对膜进行探针检测。铕 (Eu) 的荧光寿命较长,约为 1 毫秒,使用时间分辨荧光 (TRF) 检测模式进行检测可显著减少来自自发荧光或其他短寿命发射来源的背景。

蛋白印迹法资源

视频和演示

ScanLater Western Blot检测卡盒

ScanLater™ 蛋白印迹检测系统可以在微孔板读板机上进行蛋白印迹检测

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