什么是发光?
发光是物质在发生化学反应(化学发光)或酶促反应(生物发光)过程中伴随的光辐射现象。
在光学角度上,发检测比荧光检测简单,因为它不需要光源或特定的激发光器件。
图 1 - 闪光和辉光反应
发光可以是一种“闪光”或“辉光”反应,这取决于其动力学特征。闪光型发光会在短时间(通常是几秒)内发出非常明亮的信号。辉光型发光发射的信号更加稳定,但通常较弱,可持续几分钟甚至几小时。闪光型发光通常需要检测系统中包含注射器加样系统,在检测前使用注射器将底物加入到反应体系中,这样就不会错过信号收集。通常建议使用白色微孔板做发光实验,因为它们能反射光,使信号最大化(见图 1)。
发光的优点
与光吸收和荧光相比,发光是一个适合许多应用的极其普遍的检测方法。它通常有较宽的动态范围和较高的灵敏度,因为背景干扰(化合物、培养基和细胞的自发荧光)较低。此外,发光测定常常是均相的(无清洗步骤),因此在高通量应用中能更简单地进行自动化操作。
-
如何进行发光检测?
不同于荧光,需要一个外部的光源激发产生电子辐射,发光是通过化学或生物反应产生。如酶和底物。发出的光信号可通过光电倍增管 (PMT) 测定,在光电倍增管中,光子转化成电子,产生的电流与光量成比例。信号的测量值表示为相对发光单位 (RLU)。
光度计如何工作?
当使用微孔板进行发光反应时,可使用光度计(或发光微孔板读板机)测量产生的光量。将微孔板放在一个不透光的读取槽中,PMT 可以依次检测每个孔的发光量。发光读数表示为 RLU。
在多数发光应用中,会测量样品产生的全部光,而不选择特定波长。但对于 BRET 等其他应用,发光微孔板读板机可能配备滤光片或单色器,可以选择特定波长,从而检测结合或其他生物分子事件。
-
NanoBRET/BRET
生物发光共振能量转移 (BRET) 是一项检测蛋白-蛋白或蛋白-配体相互作用(包括生物发光供体和荧光受体之间的相互作用)的技术。
检测 NanoBRET 信号和分析产生的数据,需要灵敏的仪器和先进的软件。注册以了解更多:
单/双荧光素酶报告基因检测
报告基因是研究与细胞通路激活相关的基因表达的重要工具。细胞转染一种含报告基因和一段目标序列的质粒,目标序列通常是一个启动子或其他转录调控元件。当启动子被激活时,会表达报告基因并测量其表达水平。
了解更多关于双荧光素酶报告基因检测的信息:
-
客户突破性进展
日内瓦大学使用 SpectraMax® L 微孔板读板机进行荧光素酶测定
为支持日内瓦大学的重要工作,M.Yves Cambet 的团队使用 SpectraMax L 等各种先进的微孔板读板机进行基于荧光素酶的实验
活性氧 (ROS) 检测
活性氧 (ROS) 是含氧高活性分子。在真核细胞中,这些分子主要在有氧呼吸过程中产生,并且会造成各种问题,例如 DNA 损伤和脂质过氧化,从而导致细胞损伤。
我们展示了如何通过发光检测使用 SpectraMax 微孔板读板机准确定量活性氧簇 (ROS) 水平:
-
细胞毒性检测
细胞毒性的测定通常用于研究特定实验处理或潜在药物对细胞的影响。在鉴定影响细胞健康的细胞信号通路或新治疗手段时,简单易于操作的细胞毒性筛选方法是非常关键的。常见的细胞毒性指标包括细胞群中的 ATP 水平和细胞膜的完整性,二者均可使用多种微孔板实验来进行测定。
了解更多关于细胞中细胞毒性的信息:
基于 ATP 的细胞活力检测
细胞活性和细胞毒性发光 ATP 检测能提供一种灵敏且迅速的方式来测定培养物中活细胞的数量,并对实验处理的细胞毒性效应进行定量。这些检测可使用 SpectraMax® 微孔板读板机以高通量形式进行。
了解 CellTiter-Glo 发光细胞活性测定及更多信息:
-
化学发光 ELISA
血管内皮生长因子 (VEGFs) 是分泌多肽家族,与哺乳动物血管发育以及正常血管生长的疾病过程有关。
了解更多关于使用我们的微孔板读板机和数据采集、分析软件的化学发光 ELISA 法的信息:
支原体检测
支原体是最小且最简单的原核生物,也是细胞培养物中常见的污染物。支原体污染的征兆包括增殖率降低以及基因表达等细胞反应变化
了解 Lonza 的 MycoAlert 测定法和 MycoAlert PLUS 测定法,如何通过发光微孔板读板机提供一种快速简便的方法检测细胞培养物中的支原体
前沿资源
发光资料
文献
The Best Microplate Readers According to our Product Reviewers
我们的产品评论员表示,这是绝佳的微孔板读板机
Biocompare 表示:“在所有实验室中,最容易被忽视的其中一种设备就是微孔板读板机。虽然它们在根据各种……生成数据方面发挥着重要作用
应用文章
Spectral Fusion™ Illumination technology for an extended dynamic range on the SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader
在 SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机上使用 Spectral Fusion™ 照明技术可扩展动态范围
许多微孔板读板机和分光光度计均使用光电倍增管 (PMT) 来检测荧光和发光信号。PMT 的工作原理是首先检测来自……的光子
应用文章
Rapidly assess drug response in 2D and 3D breast cancer model systems with a luminescent viability assay
通过发光活性测定快速评估 2D 和 3D 乳腺癌模型系统的药物反应
多年来,涉及在平坦培养表面上以单层培养细胞的二维 (2D) 细胞培养已成为一种用于研究疾病机制……的便捷系统
电子书
Virology and Vaccine Research Microplate Reader Solutions
病毒学和疫苗研究微孔板读板机解决方案
我们明白,对于正在努力加速进行检测、使药物尽快推向市场以及致力于支持……的人来说,这是一个多么具有挑战性的时刻
电子书
The Ultimate Guide to Microplate Reader Solutions
微孔板读板机解决方案的最终指南
评价微孔板读板机的优劣并不复杂,首先,请考虑您的应用需求。如果预算有限,符合您目前主要应用的单功能读板机......
博客
FDA 21 CFR Part 11 and the importance of regulatory compliance in GMP and GLP labs
FDA 21 CFR 第 11 部分和监管合规性在 GMP 和 GLP 实验室中的重要性
《美国联邦法规》在标题 21 下所述的食品和药品法规以及欧盟的 EudraLex 附件 11 对于确保安全......至关重要
博客
Celebrating International Women’s Day
庆祝国际妇女节
2021 年 3 月 8 日星期一为国际妇女节 (IWD)。今年国际妇女节的主题为 #选择挑战,鼓励我们为性别歧视和不平等发声并寻求…...
文献
Multiple Steps from Microplate-Reader Workstations
微孔板读板机工作站的多个步骤
科学家可采用多种方法来克服工作流程中的瓶颈。例如,一个包含微孔板读板机的工作站可处理多个步骤,以此提高效率并增加……
应用文章
Measure p53-MDM2 protein interaction with NanoBRET technology
使用 NanoBRET 技术测定 p53-MDM2 蛋白相互作用
我们描述了使用 NanoBRET™ PPI Control Pair(包括互作蛋白伴侣 p53 和 MDM2)验证 SpectraMax® iD5 读板机的过程。
文献
Molecular Devices introduces enterprise-level SoftMax Pro 7.1 GxP Software
Molecular Devices 推出了企业级 SoftMax Pro 7.1 GxP 软件
基于当前业内领先的数据采集和分析软件,SoftMax Pro 7.1 GxP 软件可扩展其系统审计追踪功能,包括日期和时间戳;使……
应用文章
Monitor NF-κB activation with a sensitive dual luciferase reporter assay on the SpectraMax iD5
在 SpectraMax iD5 上通过灵敏的双荧光素酶报告基因测定技术监测 NF-κB 活化
报告基因是研究基因表达的有用工具,可替代与不同信号转导通路和病情有关的基因。荧光素酶是最......
应用文章
Detect dual luciferase expression on the FlexStation 3 microplate reader
在 FlexStation 3 微孔板读板机(酶标仪)上检测双荧光素酶表达
报告基因是研究与细胞通路激活相关的基因表达的重要工具。使用含报告基因的质粒来转染细胞…
应用文章
Measuring reactive oxygen species with SpectraMax microplate readers
使用 SpectraMax 微孔板读板机(酶标仪)检测活性氧含量
活性氧 (ROS) 是含氧高活性分子。在真核生物中,这些分子主要产生于有氧呼吸过程中,并且会造成各种问题…
应用文章
MycoAlert Mycoplasma Detection Assays on Molecular Devices Microplate Readers
在 Molecular Devices 微孔板读板机(酶标仪)上进行 MycoAlert 支原体检测分析
支原体是最小且最简单的原核生物,也是细胞培养物中常见的污染物。支原体污染的征兆包括繁殖率降低…...
应用文章
Cytotoxicity in Cells: Easy Determination Using Lonza ViaLight Plus and ToxiLight BioAssays on the SpectraMax L Microplate Luminometer
细胞毒性检测:基于SpectraMax L 微孔板读板机使用 Lonza ViaLight Plus 和 ToxiLight BioAssays 轻松测定细胞毒性
生物发光性细胞毒性检测为用户提高了检测极限、速度和准确度,且已被妥善记录。健康细胞可保持十分稳定的 ATP…
应用文章
Dual-Luciferase assays in 96- and 384-well formats on the new SpectraMax L
在新 SpectraMax L 上以 96 孔和 384 孔板形式进行双荧光素酶检测
报告基因检测被用于研究真核基因的表达。在双重报告基因检测中,使用两个载体来转染细胞,第一个载体含有实验性…
应用文章
Chemiluminescent VEGF ELISA Using the SpectraMax L Microplate Luminometer
使用 SpectraMax L 发光微孔板读板机进行化学发光 VEGF ELISA 检测
血管内皮生长因子 (VEGF) 是一系列经分泌的多肽,此类多肽与哺乳动物血管发育和疾病过程有关,该过程涉及…
应用文章
Luminescent cell viability and cytotoxicity assays on the SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader
在 SpectraMax i3x 多功能酶标仪(微孔板读板机)上进行发光法细胞活性和细胞毒性测定
Promega 的 CellTiter-Glo 检测会使用荧光素酶,并需要 ATP 以产生光。该检测中产生的发光信号取决于 ATP 的量…
应用文章
NanoBRET Technology on the SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader
SpectraMax i3x 多功能酶标仪(读板机)的 NanoBRET 技术
蛋白间相互作用 (PPI) 对细胞功能和信号传导至关重要。已采用许多方法来研究 PPI,包括免疫共沉淀和下拉测定…
视频和网络研讨会

如何通过实验室自动化解决方案从耗时的流程转变为高效的工作流程

通过 SpectraMax Mini仪器获得更多助力