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什么是荧光?

荧光是一些原子和分子吸收特定波长的光(激发:Ex),随后短暂发射 (Em) 更长波长的光的特性(图 2)。激发和发射峰之间的距离称为斯托克斯 (Stokes) 位移,该位移取决于荧光基团(图 1)。

荧光利用一个外部光源,在特定波长下激发样品。荧光基团受到适当波长的激发,分子从基态转化成受激状态。随着分子回到基态,能量会以热(损失能量)和能量更低、波长更长的光的形式释放(图 3)。

 

受 Stokes 位移和荧光团的影响

 

图 1

激发和短暂发射

 

图 2

能量更低的波长

 

图 3

如何进行荧光检测?

具备荧光强度 (FI) 检测模式的微孔板读板机使用一种光源(通常是氙闪灯或 LED)来激发特定波长的荧光基团(荧光分子)。可以使用一个特定波长的滤光片或可连续调节波长的单色器来选择激发样品所需的波长。

荧光基团随后会释放出一个不同波长的发射光,经由另一个滤光片或单色器进入检测器PMT。光电倍增管 (PMT) 可以检测这种发射的荧光,样品的荧光强度用相对荧光强度单位(RFU)表示。

 

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