荧光

什么是荧光?

荧光是一些原子和分子吸收特定波长的光(激发:Ex),随后短暂发射 (Em) 更长波长的光的特性(图 2)。激发和发射峰之间的距离称为斯托克斯 (Stokes) 位移,该位移取决于荧光基团(图 1)。

荧光利用一个外部光源,在特定波长下激发样品。荧光基团受到适当波长的激发,分子从基态转化成激发态。随着分子回到基态,能量会以热(损失能量)和能量更低、波长更长的光的形式释放(图 3)。

 

受 Stokes 位移和荧光团的影响

 

图 1

激发和短暂发射

 

图 2

能量更低的波长

 

图 3

如何进行荧光检测?

具备荧光强度 (FI) 检测模式的微孔板读板机使用一种光源(通常是氙闪灯或 LED),来激发特定波长的荧光基团(荧光分子)。可以使用一个特定波长的滤光片或可连续调节波长的单色器,来选择激发样品所需的波长。

荧光基团随后会释放出一个不同波长的发射光,经由另一个滤光片或单色器进入检测器 PMT。光电倍增管 (PMT) 可以检测这种发射的荧光,样品的荧光强度用相对荧光强度单位(RFU)表示。

 

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