光吸收

如何进行吸光度测定？

分光光度计和光吸收微孔板读板机能测量某个样品吸收的光量。能检测紫外 (UV) 区段的微孔板读板机可以直接用来测定核酸（DNA 和 RNA）或蛋白的浓度，无需对样品进行标记。某些特定波长下（取决于待测样品）入射光穿透样品，微孔板另一侧的检测器能检测出孔中样品吸收了多少光量。

吸光度测量的单位是什么？

Absorbance is measured using a spectrophotometer or microplate reader, which is an instrument that shines light of a specified wavelength through a sample and measures the amount of light that the sample absorbs.

分光光度计与微孔板读板机

常规分光光度计一次测量一个样品的吸光度，样品通常放在比色皿中，光可以水平穿透比色皿。光吸收微孔板读板机通量更高，光线垂直射入每个孔时，可测量微孔板（通常是 96 孔，甚至是 384 孔）内样品的吸光度。

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如何进行光吸收 ELISA 实验？

酶联免疫吸附检测 (ELISA) 是一种用来定量检测样品中某种抗原的方法。大多数 ELISA 都在微孔板中进行，目标抗原直接或通过某种抗体附着在微孔板孔底的固体表面上。能与底物发生反应产生有色溶液的酶偶联物可用来检测抗原。微孔板洗板机用于洗掉孔中未结合的非特异性物质，而光吸收 ELISA 微孔板读板机则检测存在靶标抗原时产生的颜色变化。

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杂散光会如何影响我的光密度 (OD) 读数呢？

杂散光是到达仪器检测器多余的光的总称。杂散光对光吸收读数的影响通常是光密度值会变得出乎意料的低；即检测出的吸光度低于样品的实际吸光度。影响通常呈线性变化，并且在 2.0-2.5 OD以上对测量结果影响最大。用户无法校正杂散光，而且杂散光通常不是由于用户原因造成的，可能的原因包括光学组件，例如激发滤光片退化等。分光光度计和光吸收微孔板读板机通常都能最大程度减少杂散光的出现。

• 使用 PathCheck 技术， 自动将光吸收值校正为 1cm 光程下的检测值

细胞活性、细胞增殖、细胞毒性测定（MTT、XTT、MTS）

使用 MTT、XTT 和 MTS 等四氮唑盐比色测定法可以用来检测细胞增殖和细胞毒性。例如，MTT 测定法的原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲臜，而死细胞无次功能，因此可通过测量光吸收值对该产物进行定量。不同测定方法的选择基于工作流程和所需时间。

阅读应用说明，了解其中的部分方法：

• 使用比色法评估细胞活性和增殖

ELISA / 免疫分析（定量抗原、细胞因子等）

酶联免疫吸附检测 (ELISA) 通常以微孔板形式用于检测特定蛋白的含量，且很多时候为测定可见光波长范围内的吸光度值。

以下是一些您可能感兴趣的关于 ELISA 的应用说明：

• 在 SpectraMax ABS Plus 微孔板读板机上使用 SimpleStep ELISA 试剂盒定量 interleukin-8 浓度
• 使用 Romer Labs AgraQuant 三聚氰胺测定法和 Molecular Devices 光吸收微孔板读板机来进行高通量三聚氰胺检测
• 使用一种经 ASBC 批准的 ELISA 方法对啤酒中的谷蛋白进行定量

DNA/RNA 定量

在分光光度计或微孔板读板机（酶标仪）上测得的 DNA 样品在 260nm 处的吸光度可用于计算其浓度。光吸收法DNA 定量适用于浓度介于大约 0.25 ug/mL 至大约 125 ug/mL 的微孔板样品。

了解如何使用光吸收微孔板读板机测量核酸吸光度的应用说明：

• 使用 SpectraMax 微孔板读板机（酶标仪）进行 DNA 和 RNA 光吸收检测
• 在 SpectraMax ABS Plus 微孔板读板机（酶标仪）上进行 DNA 和蛋白质微量样品的高通量检测

客户案例：光吸收微孔板读板机检测 DNA/RNA

OligoMaker ApS 使用 SpectraMax 190 微孔板读板机（酶标仪）检测 DNA/RNA 的合成

“我们将 SpectraMax 190 用来检测我们合成的 DNA/RNA 的一个重要步骤。我们必须定量引物和探针，以确定 DNA/RNA 合成仪上能合成多少 DNA/RNA。”

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内毒素检测

在制药和医疗器械行业中，监测生产过程中是否存在污染物是一个关键步骤。频繁出现污染物内毒素会引起发烧、发炎、头痛、恶心甚至死亡。幸运的是，使用浊度或比色测定法可以很容易地监测内毒素。

该应用说明描述了内毒素比色测定法的典型设置：

• 在 GLP/GMP 环境下使用比色测定法进行微孔板内毒素检测

酶动力学、细菌 / 微生物生长

许多生物学实验要求监测细胞生长或测定酶在长时间（数小时、数天、甚至数周）内的变化。

以下是一些专题应用说明，描述了使用我们的仪器和软件的动力学测定法设置：

• 细菌生长试验的高级动力学分析
• IPTG 的多任务动力学检测对蛋白表达和细胞生长的影响
• 使用动态模式来检测细胞的生长状况

客户案例：生物膜研究中使用的光吸收微孔板读板机

法国天主教鲁汶大学使用 SpectraMax 光吸收和多功能微孔板读板机（酶标仪）研究生物膜

UCL 的 Wafi Siala 说，“另一大优势是 SpectraMax M 系列提供 6 孔至 384 孔的微孔板尺寸，选择范围更广。”

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微量检测应用

在比色皿或微孔板中进行吸光度测量即可完成许多样品类型的定量。但当材料比较稀有或样品比较珍贵时，需要使用非常少量的样品进行定量。有对低至 2 µL 甚至 0.5 µL 的样品进行定量的仪器和配件。

了解更多关于我们的微量检测技术的信息：

• 使用 SpectraDrop 超微量检测板可直接进行蛋白定量
• 最大限度地提高 SpectraDrop 超微量检测板性能以便进行 DNA 定量
• 使用 QuickDrop 分光光度计进行核酸定量和分析

光密度 (OD) 测量

UV/VIS 分光光度计和微孔板读板机（酶标仪）的光路结构从本质上来说并不相同。在分光光度计中，使用比色皿或试管 1 cm 水平光程对样品进行读数，这使得基于消光系数的测定法简单直接。在微孔板读板机中，垂直光束会导致光程长短取决于每个孔中样品的体积。这个问题可以使用 Molecular Devices 的 PathCheck® 技术进行校正，该技术能自动将光密度 (OD) 测量值校正到标准 1 cm 的光程。

这些应用说明讨论了 PathCheck 技术的原理和如何使用：

• 使用 PathCheck 技术， 自动将光吸收值校正为 1cm 光程下的检测值
• 使用 SpectraMax Plus 384 微孔板读板机（酶标仪）测定红葡萄酒中的酚类化合物
• 使用 SpectraMax 微孔板读板机进行 DNA 和 RNA 吸光度测量

蛋白定量（BCA、Bradford、Lowry 测定法）

蛋白浓度可通过紫外分光光度计中 280nm 处的吸光度来直接测定，或使用 BCA 和 Bradford 检测等比色法来间接测定。

以下是一些您可能感兴趣的关于蛋白定量的应用说明：

• 使用 SpectraMax ABS Plus 微孔板读板机测量细胞裂解物中的总蛋白
• 使用 EMax Plus 微孔板读板机（酶标仪）进行蛋白定量
• 使用 SpectraDrop 超微量检测板可直接进行蛋白定量
• 在 SpectraMax iD5 微孔板读板机上进行基于 BCA 方法的蛋白定量