什么是吸光度?
吸光度 (A) 又称光密度 (OD),它是某种溶液吸收的光量。透光率是光穿透某种溶液的百分比。吸光度和透光率 (%) 经常用于分光光度法检测,可以如下表示:
吸光度方程
A = Log10 (I0/I)
其中,I0 是入射光的强度,I 是入射光穿透样品后的强度
T = I/I0 和 %T = 100 (T)
可以通过透光率 (%) 计算吸光度的公式是
A = 2 - log10 (%T)
使用 Beer-Lambert 定律确定浓度
可使用 Beer-Lambert 定律(表示如下)通过其吸光度计算某种样品的浓度:
A = ε * c * p
其中,ε 是摩尔吸光系数或摩尔消光系数,单位为 L/mol/cm
c 是溶液中溶质的浓度,单位为 mol/L。
p 是样品光程,单位为 cm,例如标准比色皿为 1 cm

当 Molecular Devices 推出首款紫外微孔板读板机(酶标仪)时,就实现了检测微孔板中样品紫外光 (UV) 区段光吸收值的测定。从那时开始,使用这种方法在微孔板上测量 DNA、RNA 和蛋白变得非常普遍。了解更多关于如何测量吸光度以及使用吸光度的一些关键应用的信息。
按需进行的网络研讨会
探讨吸光度检测应用:从病毒到大麻研究
使用 SpectraMax® 微孔板读板机和 SoftMax® Pro 软件读取吸光度,可测定微孔板或比色皿形式的样本的光密度。软件中功能强大的分析工具可生成标准曲线和计算数据。对于 GMP/GLP 规范实验室,系统配备了我们的 SoftMax Pro GxP 兼容软件。
关键亮点:
- 如何进行吸光度测定?
- 通过 ELISA 检测免疫球蛋白 (Ig) – 研究传染病和免疫应答的更多方法
- 简化测定吸光度的啤酒和葡萄酒分析
- 使用 ELISA 方法测定大麻中的黄曲霉毒素总量

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如何进行吸光度测定?
分光光度计和光吸收微孔板读板机能测量某个样品吸收的光量。能检测紫外 (UV) 区段的微孔板读板机可以直接用来测定核酸(DNA 和 RNA)或蛋白的浓度,无需对样品进行标记。某些特定波长下(取决于待测样品)入射光穿透样品,微孔板另一侧的检测器能检测出孔中样品吸收了多少光量。
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如何进行光吸收 ELISA 实验?
酶联免疫吸附检测 (ELISA) 是一种用来定量检测样品中某种抗原的方法。大多数 ELISA 都在微孔板中进行,目标抗原直接或通过某种抗体附着在微孔板孔底的固体表面上。能与底物发生反应产生有色溶液的酶偶联物可用来检测抗原。微孔板洗板机用于洗掉孔中未结合的非特异性物质,而光吸收 ELISA 微孔板读板机则检测存在靶标抗原时产生的颜色变化。
杂散光会如何影响我的光密度 (OD) 读数呢?
杂散光是到达仪器检测器多余的光的总称。杂散光对光吸收读数的影响通常是光密度值会变得出乎意料的低,即检测出的吸光度低于样品的实际吸光度。影响通常呈线性变化,并且在 2.0-2.5 OD以上对测量结果影响最大。用户无法校正杂散光,而且杂散光通常不是由于用户原因造成的,可能的原因包括光学组件,例如滤光片退化等。分光光度计和光吸收微孔板读板机通常都能最大程度减少杂散光的出现。
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细胞活性、细胞增殖、细胞毒性测定(MTT、XTT、MTS)
使用 MTT、XTT 和 MTS 等四氮唑盐比色测定法可以用来检测细胞增殖和细胞毒性。例如,MTT 测定法的原理是活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为不溶于水的蓝紫色结晶甲臜,而死细胞无此功能,因此可通过测量吸光度值对该产物进行定量。不同测定方法的选择基于工作流程和所需时间。
阅读应用说明,了解其中的部分方法:
ELISA / 免疫分析(定量抗原、细胞因子等)
酶联免疫吸附检测 (ELISA) 通常以微孔板形式检测特定蛋白的含量,且很多时候为测定可见光波长范围内的吸光度值。
以下是一些您可能感兴趣的关于 ELISA 的应用说明:
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DNA/RNA 定量
在分光光度计或微孔板读板机(酶标仪)上测得的 DNA 样品在 260nm 处的吸光度可用于计算其浓度。光吸收法DNA 定量适用于浓度介于大约 0.25 ug/mL 至大约 125 ug/mL 的微孔板样品。
了解如何使用光吸收微孔板读板机测量核酸吸光度的应用说明:
客户案例:光吸收微孔板读板机检测 DNA/RNA
OligoMaker ApS 使用 SpectraMax 190 微孔板读板机(酶标仪)检测 DNA/RNA 的合成
“我们将 SpectraMax 190 用来检测我们合成的 DNA/RNA 的一个重要步骤。我们必须定量引物和探针,以确定 DNA/RNA 合成仪上能合成多少 DNA/RNA。”
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内毒素检测
在制药和医疗器械行业中,监测生产过程中是否存在污染物是一个关键步骤。频繁出现污染物内毒素会引起发烧、发炎、头痛、恶心甚至死亡。幸运的是,使用浊度或比色测定法可以很容易地监测内毒素。
该应用说明描述了内毒素比色测定法的典型设置:
酶动力学、细菌 / 微生物生长
许多生物学实验要求监测细胞生长或测定酶在长时间(数小时、数天、甚至数周内)的变化。
以下是一些专题应用说明,描述了使用我们的仪器和软件的动力学测定法设置:
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客户案例:生物膜研究中使用的光吸收微孔板读板机
法国天主教鲁汶大学使用 SpectraMax 光吸收和多功能微孔板读板机(酶标仪)研究生物膜
UCL 的 Wafi Siala 说,“另一大优势是 SpectraMax M 系列提供 6 孔至 384 孔的微孔板尺寸,选择范围更广。”
微量检测应用
在比色皿或微孔板中进行吸光度测量即可完成许多样品类型的定量。但当材料比较稀有或样品比较珍贵时,需要使用非常少量的样品进行定量。有对低至 2 µL 甚至 0.5 µL 的样品进行定量的仪器和配件。
了解更多关于我们的微量检测技术的信息:
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光密度 (OD) 测量
UV/VIS 分光光度计和微孔板读板机(酶标仪)的光路结构从本质上来说并不相同。在分光光度计中,使用比色皿或试管 1 cm 水平光程对样品进行读数,这使得基于消光系数的测定法简单直接。在微孔板读板机中,垂直光束会导致光程长短取决于每个孔中样品的体积。这个问题可以使用 Molecular Devices 的 PathCheck® 技术进行校正,该技术能自动将光密度 (OD) 测量值校正到标准 1 cm 的光程。
这些应用说明讨论了 PathCheck 技术的原理和如何使用:
蛋白定量(BCA、Bradford、Lowry 测定法)
蛋白浓度可通过紫外分光光度计中 280nm 处的吸光度来直接测定,或使用 BCA 和 Bradford 检测等比色法来间接测定。
以下是一些您可能感兴趣的关于蛋白定量的应用说明:
光吸收资源
电子书合集
Streamline beer, wine, and food quality control and safety analyses
简化啤酒、葡萄酒和食品质量控制以及安全性分析
光吸收微孔板读板机广泛用于制药、生物技术、食品与饮料…中的研究、药物发现、生物检测验证、质量控制和制造过程…
应用文章
Quantifying gluten in beer using an ASBC-approved ELISA method
使用一种经 ASBC 批准的 ELISA 方法对啤酒中的谷蛋白进行定量
随着乳糜泻患病率近年来不断上升,越来越多的人努力避免谷蛋白,监测食品和饮料中的谷蛋白水平变得越来越重要。
应用文章
Measure total protein in cell lysates with SpectraMax ABS Plus Microplate Reader
使用 SpectraMax ABS Plus 微孔板读板机测量细胞裂解物中的总蛋白
对细胞裂解物中的蛋白浓度进行定量是蛋白印迹法和酶联免疫吸附实验 (ELISA) 等许多下游应用的一个关键步骤。
应用文章
Streamline BCA-based protein quantitation on the SpectraMax iD5 reader
在 SpectraMax iD5 微孔板读板机上进行基于 BCA 方法的蛋白定量
了解如何在 SpectraMax® iD5 多功能微孔板读板机上使用 BCA 蛋白检测试剂盒来定量细胞蛋白样本。
应用文章
Quantitate interleukin-8 concentrations on the SpectraMax ABS Plus Microplate Reader with the SimpleStep ELISA kit
在 SpectraMax ABS Plus 微孔板读板机上使用 SimpleStep ELISA 试剂盒定量 interleukin-8 浓度
了解如何在 SpectraMax® ABS Plus 微孔板读板机(酶标仪)上使用便利的预设方法 进行人 IL-8 SimpleStep ELISA 检测。
应用文章
Low-volume, high-throughput DNA and protein detection on the SpectraMax ABS Plus Microplate Reader
在 SpectraMax ABS Plus 微孔板读板机(酶标仪)上进行 DNA 和蛋白质微量样品的高通量检测
在遗传学和分子生物学的许多复杂的上游检测,核酸和蛋白定量是必不可少的步骤。已开发出各种方法以…
应用文章
Maximizing performance of the SpectraDrop Micro-Volume Microplate for DNA quantitation
最大限度地提高 SpectraDrop 超微量检测板性能以便进行 DNA 定量
Molecular Devices SpectraDrop™ 超微量微孔板可让用户在 SpectraMax® 微孔读板机(酶标仪)上读取每块板多达 64 份样品,样品体积可低至 2µL。…
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Nucleic acid quantitation and analysis using the QuickDrop Spectrophotometer
使用 QuickDrop 分光光度计进行核酸定量和分析
分光光度计是用于定量和分析生物物质的完善技术。在这些物质中,核酸是…
电子书合集
Streamline absorbance assays for nucleic acid & protein quantitation
简化核酸和蛋白定量的吸光度检测
吸光度微孔板读板机广泛用于制药、生物技术、食品与饮料...中的基础研究、药物发现、生物检测验证、质量控制和制造过程。
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Assess cell viability and proliferation with colorimetric readouts
使用比色法评估细胞活性和增殖
了解光吸收微孔板读板机如何提供评估细胞活性和增殖所需的比色读数。
应用文章
Advanced kinetic analysis of a bacterial growth assay
细菌生长试验的高级动力学分析
难以杀死的细菌已成为医院获得性感染方面的一个难题。许多制药公司都对确定哪些化合物能够杀死这些细菌很感兴趣…
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Measure long-term cell growth using a discontinuous kinetic reading
使用动态模式来检测细胞的生长状况
许多生物学实验要求监测细胞生长或测定酶在长时间(数小时、数天、甚至数周内)的变化。此外,某些模型生物…
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DNA and RNA absorbance measurements using SpectraMax Microplate Readers
使用 SpectraMax 微孔板读板机(酶标仪)进行 DNA 和 RNA 光吸收检测
当 Molecular Devices 推出首款紫外微孔板读板机(酶标仪)时,就实现了检测微孔板中样品紫外光 (UV) 区段光吸收值的测定。从此之后,DNA、RNA 等的微孔板测定…
应用文章
High-throughput melamine detection with Romer Labs AgraQuant Melamine Assays and Molecular Devices Absorbance readers
使用 Romer Labs AgraQuant 三聚氰胺测定法和 Molecular Devices 光吸收微孔板读板机来进行高通量三聚氰胺检测
有机三聚氰胺被用于制造许多产品,包括塑料、阻燃剂、色素和肥料。向动物饲料等产品中添加三聚氰胺的做法…
应用文章
Optical density measurements automatically corrected to a 1-cm pathlength with PathCheck Technology
使用 PathCheck 技术, 自动将吸光度值校正为 1cm 光程下的检测值
UV/VIS 分光光度计和微孔板读板机(酶标仪)的光路结构从本质上来说并不相同。使用分光光度计读取样品时,通过比色皿或试管(处于水平位置,且穿过…
应用文章
Protein quantitation with the EMax Plus Microplate Reader
使用 EMax Plus 微孔板读板机(酶标仪)进行蛋白定量
终点法读板机(酶标仪)在实验室中可用于各种用途,因为吸光度已经成为许多应用的首选检测。示例包括用于定量细胞因子和…
应用文章
Microplate-based endotoxin testing in GLP/GMP environments using a colorimetric assay
在 GLP/GMP 环境下使用比色测定法进行微孔板内毒素检测
在制药和医疗器械行业中,监测生产过程中是否存在污染物是一个关键步骤。内毒素作为一种常见的污染物会导致发热…
应用文章
Phenolic compounds measurement in red wines using the SpectraMax Plus 384 Microplate Reader
使用 SpectraMax Plus 384 微孔板读板机(酶标仪)测定红葡萄酒中的酚类化合物
测定红葡萄酒中的单宁酸、铁反应性酚类物质、花青素和聚合色素是葡萄酒生产业中质量控制的一个重要环节。精准可靠...
应用文章
Direct protein quantitation using the SpectraDrop Micro-Volume Microplate
使用 SpectraDrop 超微量检测板可直接进行蛋白定量
使用紫外光吸光度进行蛋白定量是一种快速、无损的方法,它取决于色氨酸和酪氨酸残基的近紫外光波长吸光度…
应用文章
Multitask kinetic measurements of IPTG’s effects on protein expression and cell growth
IPTG 的多任务动力学检测对蛋白表达和细胞生长的影响
随着时间的推移同时测量多个不同的信号输出对于研究蛋白质或化合物对细胞生长或基因表达的影响特别有用。通过这种方法…
视频和网络研讨会

探讨吸光度检测应用:从病毒到大麻研究