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ClonePix 2 高效细胞克隆筛选系统

高通量筛选和客观选择哺乳动物细胞

采用 ClonePix™ 2 系统, 相比传统技术, 可在更短的时间内自动筛选更多克隆, 选择具有最佳表达水平的细胞, 以及实现精确挑选。现在, ClonePix 系统已在全球 100 多个实验室中使用, 以提高工作流程效率, 使更多的时间能用于更好地了解目标蛋白质特征, 并运行新的项目。大量的生物制药公司已经在其日常使用中应用 ClonePix 系统, 并且相关数据在科学出版物和会议中得到了越来越多的引用。

  • 选择具有最优表达水平的细胞, 且一致性更好。提高寻获优质细胞的概率。 
  • 缩短细胞系/抗体开发时间,   可替代传统的有限稀释法。
  • 基于原位表达水平在更早期排除表达差的细胞。
  • 准确且可信地挑选细胞克隆。通过精密的机械性能降低对克隆的影响。
  • 更少的孔板处理步骤提高工作流程效率。

开发生物治疗用途的抗体

选择最优的分泌细胞系

选择分泌最优单克隆抗体的细胞克隆

  • 使用白光和荧光成像筛选 5463 个克隆(5 块板)
  • 获得 16 个高分泌细胞
  • 在 CloneMedia-CHO 中培养 CHO-S 细胞
  • 通过添加 CloneDetect 试剂筛选分泌 IgG 的克隆
  • 根据荧光排列克隆
    • 用户定义的筛选参数
  • 系统可准确地挑选克隆用于放大培养
    • 克隆间距参数设定可避免挑选相邻的克隆
    • 系统将每个克隆转移到 96 孔板的每个孔中 
表达 CHO-S 的人 IgG - ClonePix 2哺乳动物细胞克隆拣选系统
表达人 IgG 的 CHO-S细胞:
第13天PetriWell-1孔板的拼接图像
分泌细胞系 - ClonePix 2 克隆筛选系统
排序图
克隆按照(外部)荧光强度排序

成像原理 — 非标记检测分泌的抗体

分泌抗体的非标记检测 - ClonePix 2 哺乳动物克隆拣选系统

  • 在半固体培养基中培养的分泌抗体的克隆
  • 添加 CloneDetect 试剂
  • 分泌的抗体形成荧光沉淀

细胞系开发用于生物治疗

使用 ClonePix 系统筛选最优的生产用 NS/0细胞和CHO细胞系

  • 可比传统方法筛选更多的克隆, 从而增加发现稀有、高分泌细胞的可能性
  • 可自动分离单克隆, 无需有限稀释法
  • 原位显示高表达细胞系, 从而无需进一步处理不要的克隆。

以上资料由MEDIMMUNE LLC 公司细胞系培养部门组长 JIANGUO YANG 博士提供

技术比较:
 

NS/0 和 CHO 细胞系 - ClonePix 克隆筛选系统

ClonePix 系统

  • 从亲代细胞系到摇瓶:1 个月
  • 筛选 10000 个克隆

有限稀释法

  • 从亲代细胞系到摇瓶:2 月
  • 筛选 1000 个克隆
克隆方法比较:
 

克隆方法对比 - ClonePix 2 哺乳动物克隆拣选系统

ClonePix 系统

  • 每周 2500 个克隆
  • 1 周克隆

有限稀释法

  • 每周 300 个克隆
  • 3 周克隆

ClonePix 系统和有限稀释法筛选到的最佳克隆的比较

克隆 滴度 (g/L) qP (pcd)  
克隆 1 4.5 54.6 ClonePix 系统
克隆 2 4.4 44.6
克隆 3 4.3 49.4
克隆 4 4.0 43.8
克隆 A 2.9 32.7 有限稀释法
克隆 B 2.8 21.0
克隆 C 2.7 20.9
克隆 D 2.6 29.0
  • 通过此方法筛选的细胞系产量大约是常规方法的 2 倍
  • 来自相同亲本(NS/0 细胞)的亚克隆

采用 ClonePix 系统方法最终获得的高滴度克隆

克隆 滴度 (g/L)
1 5.8
2 5.3
3 5.7
4 5.8
  • CHO 细胞 — 摇瓶中 14 天分批补料过程
  • 获得高滴度克隆(NS/0:4-5g/L, CHO:5-6g/L), 甚至在过程优化之前就可获得
来自 MedImmune 的结论:“ClonePix 系统是用于细胞系开发的强大工具。这种方法可更快地获得优质生产细胞, 且耗费的人力更少, 从而显著缩短细胞系开发时间。

更多信息:

快速且高效地筛选分泌治疗性蛋白质/肽的高产哺乳动物细胞:应用下载

去除不稳定的克隆

  • 使用 ClonePix 系统揭示克隆的不稳定性
  • 将所选克隆的等分样本重新接种到半固体培养基中, 并在 4-7 天内重新成像以验证和比较子克隆的产量和/或在 7-14 天内对亚克隆进行重新筛选。

实例所示为第二轮筛选获得稳定克隆的结果。系统转移每个克隆至96孔板的每个孔内。

稳定克隆的选择 - ClonePix 2 克隆筛选系统
收集并分析前2%转染CHO细胞的表达量

去除不稳定的克隆 - ClonePix 2 哺乳动物克隆拣选系统
第二轮筛选后产率和荧光强度的比较
注意:不稳定的克隆(高荧光、低产率)已被排除。

用CloneSelect Imager跟踪细胞汇合度和细胞数量

抗体发现用于科学研究

找出高产的杂交瘤细胞系用于抗体开发

  • 亲代杂交瘤细胞系扩增后于ClonePix系统上进行筛选
  • 用ClonePix 系统挑选高产克隆, 然后用 CloneSelect Imager系统监测其生长
  • 基于靶肽结合实验的抗原特异性筛选获取的优质细胞系
  • 从试验生产和细胞库分离高价值的特异性亚克隆
  • 通过找到具有更高滴度的分泌 IgG 的优质生产细胞, 此工作流程可使杂交瘤筛选时间减少 50% 以上
滴度杂交瘤细胞系 - ClonePix 2 克隆筛选系统
白光图像
抗体开发 - ClonePix 2 哺乳动物克隆拣选系统
荧光图像

ClonePix 系统对亲代杂交瘤细胞的数百个亚克隆进行高通量筛选, 帮助挽救和稳定可分泌高度特异性单克隆抗体(针对免疫原性病毒抗原)的高产杂交瘤细胞系。

更多信息

使用 ClonePix 和 CloneSelect Imager技术促进病毒特异性杂交瘤细胞的开发:应用下载


成像原理 — 非标记检测分泌的抗原特异性 mAbs分泌的抗原特异性单克隆抗体

  • 在半固体培养基中培养杂交瘤克隆
  • 复合起始因子 (CIF) 捕获分泌的 mAb(单克隆抗体)
  • 荧光偶联的抗原靶向分泌 IgG 的克隆

更多信息

筛选抗原特异性杂交瘤或 B 细胞

筛选抗原特异性杂交瘤

  • 原位筛选并选择抗原特异性克隆
  • 适用于多种抗原
    • - 160kD 的多聚体蛋白至 2.6kD 的磷酸肽
抗原特异性杂交瘤
白光图像
FITC 结合的 60kd 抗原特异性 IgG - ClonePix 2 系统
标记FITC的60kD抗原特异检测分泌IgG的克隆
筛选抗原特异性杂交瘤
白光图像
FITC 结合的 60kd 对照蛋白
标记FITC的 60kD对照蛋白

成像原理 — 非标记检测分泌的抗原特异性 mAbsimage_antigen_0.gif

  • 在半固体培养基中培养杂交瘤克隆
  • 复合起始因子 (CIF) 捕获分泌的 mAb(单克隆抗体)
  • 荧光偶联的抗原靶向分泌 IgG 的克隆

更多信息

蛋白表达和生产

挑取和开发表达GPCR的细胞系

检测和挑取内源性水平表达低的GPCR细胞

  • 将阳性 (CHO-M1) 和阴性 (CHO-K1) 细胞接种在 CloneMedia 中并孵育 8-10 天
  • 加入标记的抗体, 然后将细胞在明场和荧光通道中成像
  • 挑取在两个通道中均可见的细胞并培养
  • 通过 FLIPR Tetra 系统的荧光钙信号验证 GPCR 表达
表达 GPCR 的细胞系
利用明场定位并识别克隆
GPCR 表达
荧光图像显示表达GPCR的阳性细胞

更多信息

利用报告蛋白筛选

例如:检测内源性GFP报告蛋白 

  • 转染表达GFP融合蛋白的人乳腺癌细胞 (MCF-7)
  • 细胞在MEM Earle液体培养基+10% FBS内形成贴壁克隆
  • 第 8 天:选择性地挑取高表达GFP蛋白的克隆
固有报告基因表达 - 白光
白光
固有 GFP 报告基因
GFP
固有报告基因表达 - 挑取后
挑取之后

利用细胞表面标记物筛选

  • 稳定转染P2Y1受体的贴壁 CHO K-1细胞细胞表面表达标记物
  • 在基于 CloneMatrix 的半固体培养基中培养细胞
  • 第 8 天:通过雾化器添加 FMAT-Blue 标记的抗 P2Y1 受体多克隆抗体
  • 第 9 天:筛选并挑取高表达 P2Y1 受体的细胞

更多信息:

通过细胞表面蛋白快速自动筛选哺乳动物细胞克隆:应用下载

筛选分泌重组蛋白的细胞

检测分泌型 His/FLAG 标记的单体蛋白

  • 稳定转染的贴壁 CHO 细胞
  • 在基于 CloneMatrix 的半固体培养基中将细胞培养成悬浮克隆, 用 FITC 偶联的抗 His 和抗 FLAG 多克隆抗体检测
  • 在第 8 天筛选和挑取高分泌细胞
标记的重组蛋白
白光图像
FITC 标记的重组蛋白
FITC 图像

成像原理

成像原理 - 标记重组蛋白

干细胞筛选/干细胞系的维持

利用集落形态保持线(白光)

利用白光和形态学对人类干细胞 (BG01V hES) 进行维持

  • 人干细胞 (BG01V hES) 在液体培养基的饲养层细胞上形成克隆
  • 孔板成像, 并基于形态学挑取克隆
白光菌落形态
ClonePix系统白光成像干细胞克隆

CloneSelect Imager 细胞生长分析系统
挑取至96孔板的典型克隆。
图片用CloneSelect Imager采集。

克隆形成

细胞在含半固体培养基 CloneMedia 的源板中生长。这种方法可促进大量细胞的接种, 并确保形成离散的克隆, 从而在随后作为独立克隆进行回收。

常用细胞类型都可以在CloneMedia生长并形成克隆。使用 CloneSelect Imager成像仪采集图像

CHO 克隆形成
无血清悬浮适应的CHO细胞克隆,
接种第8天成像。

杂交瘤克隆形成
生长于CloneMedia-Hybridoma
的杂交瘤细胞克隆, 接种后第8天成像。

HEK293 克隆形成
无血清悬浮培养的HEK293细胞克隆
生长于CloneMedia-HEK,
接种第13天成像。

 
CHOK1SV 克隆形成
无血清悬浮培养的CHOK1SV细胞克隆
生长于CloneMedia-CHOK1SV,
接种后第9成像。

 

多种检测方法可选

白光成像用于识别和挑取克隆, 荧光用于指示表达水平

检测重组蛋白和表达标记

重组蛋白和表达标记物
蛋白含标为标签, 如His, FLAG和Fc

免标记检测来自杂交瘤细胞的抗原特异性单克隆抗体 

杂交瘤抗原特异性单克隆抗体
荧光偶联或带标签的抗原蛋白加上CIF
可以形成沉淀。

免标记检测分泌的抗体 

检测分泌的抗体
荧光偶联的 CloneDetect 试剂可以原位检测
分泌的小鼠、大鼠以及人的 IgG 抗原。这些试剂可以以液体方式添加, 也可以喷雾添加。
从而平行比较数千个克隆的相对分泌水平。
1000

成像与分析

系统用白光和荧光成像克隆并分析。

克隆成像和分析
白光成像识别克隆并
测量克隆的形态,
如克隆尺寸和间距
克隆荧光成像分析
荧光成像检测表达水平

排序和数据显示

排名和数据显示 - ClonePix 2 系统
排序图
  • 根据荧光排列克隆
  • 用户定义选择参数, 系统选择克隆
    • 形态学标准, 如尺寸、圆度和克隆间距
    • 定量标准, 如分泌蛋白和生产的特定蛋白
  • 记录源板和终板条形码实现数据跟踪。
  • 采集克隆挑取之前和之后的图像并与其他数据一起保存, 包括挑取坐标

*Download the specifications in our ClonePix 2 brochure here.

*在我们的ClonePix 2手册中下载规格 这里.

CLONEPIX 2系统规格
成像 
软件 预安装在高规格个人电脑、Microsoft Windows 7上的专用成像软件
白光成像 •透射光用于低对比菌落成像, 如悬浮液中的黏附单层或小菌落
•落射光用于菌落采集时的成像
数据跟踪 用于源板和目标板的内部条形码阅读器可对每轮进行数据跟踪
摄像头 集成的 16 位冷却 CCD 摄像机
成像速度 6 孔微孔板:5 波长 2 分钟(标准条件)
分辨率 标准:28 微米;最长:1.5 微米
仪器
密封 100 级 HEPA 过滤的全封闭工作环境
源板类型 PetriWell-6 板、PetriWell-1 板、Greiner 6孔板、Nunc 6孔板、Nunc OmniTray
目标板类型 PetriWell-96 板、Costar 96 孔板、Greiner 96 孔板、Nunc 96 孔板、Falcon 96 孔板
源板通量 10 板
终板通量 10 板
挑头 8 x 挑针 - 每根针单独控制
挑针大小 挑针的直径专用于应用 - F1:悬浮细胞;F2:贴壁细胞
挑选速度 > 200 菌落/小时
洗槽 乙醇洗槽(自动加注)
挑选系统液体 5 升无菌水用品, 5 升废弃瓶
挑针干燥 专利的卤素灯干燥站
仪器尺寸 1010 mm(宽)x 900 mm(深)x 1490 mm(高)
仪器重量 350kg
压缩空气规格
空气 干净、无油、亚微米过滤
最低工作压力 6 bar(大约 90psi)
最低工作体积 80 L/分
可选的压缩机规格
压缩机组 干净、无油、亚微米过滤压缩机
尺寸 250 mm(宽)x 600 mm(深)x 750 mm(高)
重量 60kg
最低工作压力 6 bar
最低工作体积 80 L/分
噪声水平 61 分贝 (A)
监管批准
合规性 CE
质量 ISO9001:2008 认证
可用资源
附带 网络研讨会
文献 产品支持
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  • 使用 ClonePix 和 CloneSelect Imager技术改进免疫诊断用杂交瘤细胞的发现
  • 使用 ClonePix 2 系统鉴定和选择 GPCR 细胞系

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