利用自动细胞成像技术进行细胞凋亡分析

细胞凋亡是一个程序性细胞死亡的过程,它对包括胚胎发育和正常组织维护在内的许多生物过程都很重要。细胞凋亡调控的异常牵涉到多种疾病,包括癌症。生化事件导致细胞形态特征发生变化,如细胞收缩、核分裂、染色质凝聚和 mRNA 衰减,并最终导致细胞死亡。细胞凋亡可以通过内在或外在的途径来启动,这两种途径都是通过激活组蛋白酶来诱导细胞死亡。

分析细胞凋亡的一种方法是检测caspase-3 和caspase-7,这两种酶都在细胞凋亡执行期被激活。例如,EarlyTox™ caspase-3/7 NucView 488分析试剂盒提供了可检测完整细胞内的caspase-3/7 活性的底物。本底物包括与Caspase-3/7 DEVD 识别序列关联的 DNA 荧光染料。最初为非荧光,底物可透过细胞质膜并进入细胞质。在凋亡细胞中,半胱天冬酶-3/7 裂解底物,释放出高亲和力的 DNA 染料,其迁移到细胞核并与 DNA 结合。在 500nm 处的激发导致在 530nm 处发出明亮的绿色荧光,这可以用来评估组蛋白酶激活的水平。然后,可以通过自动成像技术来对凋亡细胞进行可视化和定量分析。

有遮蔽和无遮蔽的凋亡细胞

HeLa 细胞经化合物星孢菌素处理,并用 EarlyTox caspase-3/7 NucView 488 分析试剂盒(绿色)对之进行染色。Mask(右)显示凋亡细胞呈绿色和非凋亡细胞呈红色。

可以在 ImageXpress Pico 自动细胞成像系统上分析凋亡细胞图像,该系统提供了专为轻松采集和分析图像而设计的预配置“凋亡”方案模板。可以自动计算出凋亡细胞和活细胞的数量和百分比等有用的输出数据。下面是典型的成像和细胞凋亡分析的工作流程。

凋亡工作流程

典型的凋亡细胞成像与分析工作流程。

总之,使用 ImageXpress Pico 系统进行凋亡检测的优势包括:

  • 允许直接观察和监测细胞健康
  • 能够对细胞进行客观的评估,从而产生可重现的结果
  • 自动确定有价值的输出数据,如凋亡细胞的数量和百分比 (%)

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