酶联免疫吸附实验 (ELISA)

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什么是 ELISA?

酶联免疫吸附实验 (ELISA) 是一种用来定量检测样本中某种抗原的方法。抗原是一种会导致动物免疫系统发起防御反应的毒素或其他外来物质,例如流感病毒或环境污染物。潜在抗原的范围很广,因此在许多研究和检测领域中使用 ELISA 来检测和定量各种样本类型中的抗原,如使用 ELISA 分析细胞裂解物、血样、食品等特定物质。

ELISA 有四种主要类型:直接法、间接法、竞争法和双抗夹心法。每种类型的描述如下,并用图说明了分析物和抗体是如何结合和使用的。

双抗夹心法 ELISA 检测的步骤

大多数夹心 ELISA 都在微孔板中进行,其中微孔板孔的底部用作抗体与其他试剂结合的固体表面。微孔板洗板机用于洗去孔中的非特异性物质,而吸光度 ELISA 微孔板读板机则检测存在靶抗原时产生的颜色变化。而且,读板机软件也可用于绘制标准曲线并计算结果。

下图显示了标准双抗夹心法 ELISA 检测的工作流程:

ELISA 检测工作流程 \

与一位专家谈话

第 1 步: 捕获抗体与 ELISA 板孔结合

第 2 步: 将样品添加到孔中 – 样品中的抗原与捕获抗体结合。

第 3 步: 洗涤微孔板 – 洗去未结合的物质,仅留下感兴趣抗原

第 4 步: 添加检测抗体 – 酶偶联检测抗体与感兴趣抗原上的第二个位点结合

第 5 步: 洗涤微孔板 – 洗去未结合的抗体,仅留下对感兴趣靶标具有特异性的抗体

第 6 步: 添加底物 – 底物通过检测抗体上的酶发生转化,从而产生颜色变化

第 7 步: 读取板 – 微孔板读板机检测有色反应产物并输出光密度 (OD) 值

第 8 步: 计算结果 – 计算并分析每份样品中的抗原量

虽然 ELISA 设置容易,但检测程序耗时耗力。适用于高通量微孔板测定的实验室自动化工作流程可实现无人值守,提升测定程序的通量、有效性、效率和可重复性。

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ELISA 检测与应用

酶联免疫吸附实验是许多研究和生物技术实验室中常用的一种分析技术。以下是与 ELISA 检测和应用相关的一系列应用说明、研究和技术。

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ELISA 实验的工作流程

一个典型夹心 ELISA 实验步骤的工作流程涉及多个试剂添加、孵育和洗涤步骤。在此,我们强调了进行 ELISA 检测的每一步以及所需的仪器和工具,包括微孔板洗板机、吸光度 ELISA 读板机和软件。

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