酶联免疫吸附实验 (ELISA)




什么是 ELISA?

ELISA 即酶联免疫吸附实验,是一种用于定量检测样品抗原的方法。抗原是一种会导致动物免疫系统发起防御反应的毒素或其他外来物质,例如流感病毒或环境污染物。潜在抗原的范围很广,因此在许多研究和检测领域中使用 ELISA 检测和定量各种样本类型中的抗原。使用 ELISA 分析细胞裂解物、血样、食品等的特定目标物质。

夹心 ELISA 检测的步骤

大多数夹心ELISA检测在微孔板中进行,微孔板的底部用作抗体和其他试剂结合的固体表面。微孔板洗板机用于洗掉孔中的非特异性物质,而微孔板读板机则检测存在靶标抗原时产生的颜色变化。读板机软件用于绘制ELISA的标准曲线并计算结果。

以下是进行典型夹心 ELISA 检测的步骤:

ELISA 分析和技术

ELISA 是一种在许多研究和生物技术实验室中常用的分析技术。以下是与重要 ELISA 检测和应用相关的一系列应用说明、研究和技术。下面我们简要介绍四种常见 ELISA 类型,包括直接、间接、竞争性和夹心 ELISA。


  • 直接 ELISA

    在直接 ELISA 中,抗原结合微孔板孔底,然后再结合对该抗原有特异性的抗体,并且还偶联可进行检测的酶或其他分子。

    间接 ELISA

    在间接 ELISA 中,抗原结合微孔板孔底,然后添加对该抗原有特异性的抗体。随后偶联酶或其他检测分子的二抗结合一抗。

  • 竞争性 ELISA

    在竞争性 ELISA 中,参照抗原结合微孔板孔底。将样品和抗体加入孔中,如果样品中存在抗原,则它会与参照抗原竞争结合抗体。洗掉没有结合的物质。样品中的抗原越多,最终在孔底结合参照抗原的抗体就越少,信号就越弱。

    夹心 ELISA

    对于夹心 ELISA,使用对靶标抗原上的两个不同表位具有特异性的两种抗体。捕获抗体结合微孔板孔底,并结合该抗原的一个表位。检测抗体结合该抗原的不同表位,并偶联可进行检测的酶。(如果检测抗体未偶联,则需要酶偶联的检测二抗)。

  • 使用 ELISA 试剂盒更快地获得结果

    使用 CatchPoint SimpleStep ELISA 试剂盒更快地获得 ELISA 结果

    典型的 ELISA 实验步骤较为耗时,有多个孵育和洗涤步骤。CatchPoint SimpleStep ELISA 试剂盒为用户提供了一个 90 分钟的 ELISA 工作流程,与传统 ELISA 相比,时间缩短了大约三分之二。

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    定量 Interleukin-8 ELISA

    在短短 90 分钟内定量 interleukin-8 浓度

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  • 用 ELISA 试剂盒进行三聚氰胺检测

    使用 Abraxis Melamine ELISA试剂盒和Molecular Devices光吸收酶标仪(读板机)进行高通量三聚氰胺检测

    Abraxis 三聚氰胺酶联免疫吸附实验(ELISA) 是一种根据抗体对三聚氰胺的检测结果对三聚氰胺进行定量筛选的免疫检测。

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    ELISA-细胞因子 Interleukin-22

    使用 EMax Plus 微孔板读板机(酶标仪)进行蛋白定量

    使用夹心 ELISA 比较 EMax Plus 微孔板读板机和 EMax 终点读板机的性能,以对细胞因子 Interleukin-22(小鼠/大鼠 IL-22)的水平进行定量。

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  • 化学发光 VEGF ELISA

    使用 SpectraMax L 发光微孔板读板机进行化学发光 VEGF ELISA 检测

    血管内皮生长因子 (VEGF) 是一系列分泌的多肽,这些多肽与哺乳动物血管发育以及正常血管生长的疾病过程有关。

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    使用 ELISA 对谷蛋白定量

    使用一种经 ASBC 批准的 ELISA 方法对啤酒中的谷蛋白进行定量

    检测 6 种市售啤酒中的麦胶蛋白水平,以使用 RIDASCREEN 麦胶蛋白竞争性 ELISA 测定谷蛋白水平。

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ELISA 实验的工作流程

典型 ELISA 实验的工作流程有多个试剂添加、孵育和洗涤步骤。ELISA 工作流程展示了如何进行一个典型的夹心 ELISA。每个步骤都分解了 ELISA 过程,并强调了进行 ELISA 检测所需的仪器和工具,包括微孔板洗板机、吸光度 ELISA 读板机和读板机软件。

 

工作流程:ELISA 检测实验步骤
 
抗体结合孔

捕获抗体结合孔

首先,捕获抗体结合微孔板孔底。

微孔板孔

ELISA 平板

大多数 ELISA 在 96 或 384 孔微孔板中进行,96 孔板最为常见,有时也称为酶标板。微孔板孔底作为抗体和其他试剂附着的固体表面。微孔板通常包含在 ELISA 试剂盒中。

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光谱
移动光谱
添加样品
添加移动样品

添加样品

将样品添加到孔中,样品中的抗原结合捕获抗体。

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洗涤微孔板
洗涤移动微孔板

洗涤微孔板

洗掉没有结合的物质,仅留下目的抗原,并最大程度降低高背景信号的可能性。

ELISA 读板机和洗板机

ELISA 读板机和洗板机

使用带有 SoftMax Pro 数据采集软件的 EMax Plus 微孔板读板机和 MultiWash+ 微孔板洗板机可为您的 ELISA 工作流程提供全套解决方案。

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添加检测抗体
添加移动检测抗体

添加检测抗体

酶偶联的检测抗体结合目的抗原上的第二个位点,提供了检测抗原的方法。

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洗涤微孔板
洗涤移动微孔板

洗涤微孔板

洗掉没有结合的抗体,仅留下对目的靶标具有特异性的抗体,并再次最大程度降低背景信号的可能性。

AquaMax 微孔洗板机

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AquaMax 微孔板洗板机:在所有孔中同时进行 96 和 384 孔吸液和分液,从而实现高精度检测和更快的微孔板处理,无需进行板孔设置或象限处理。

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添加底物
添加移动底物

添加底物

检测抗体上的酶会转化底物,从而产生颜色变化,其中强度与存在的抗原数量成比例。

根据所用的酶和底物,读数可以是荧光读数,也可以是发光读数。

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读取微孔板
读取移动微孔板

读板

微孔板读板机可检测彩色反应产物并输出光密度 (OD) 值,这个值表明每个孔的内容物吸收了多少光。

ELISA 读板机原理

ELISA 读板机

SpectraMax ABS Plus Absorbance ELISA 微孔板读板机等 ELISA 读板机可检测存在靶标抗原时产生的颜色变化。通过测量孔内物质吸收了多少通过微孔板孔的光即可完成。存在的抗原越多,吸光度值越高。

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ELISA 读板机软件

ELISA 读板机软件

我们的 SoftMax Pro 数据分析软件等 ELISA 读板机软件用于绘制标准曲线,并根据微孔板读板机提供的吸光度值来计算结果。

根据标准曲线精确计算每份样品中的抗原量。预配置的实验步骤可自动计算结果,从而节省时间。

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计算结果
计算移动结果

计算结果

计算每份样品中的抗原量,并且可比较不同的样本,例如使用不同处理条件的细胞。

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ELISA 资源

视频和演示

SpectraMax ABS 和 ABS Plus 光吸收微孔读板机(酶标仪)

SpectraMax ABS 和 ABS Plus 光吸收微孔读板机(酶标仪)

SoftMax Pro 7 软件

SoftMax Pro 7 软件

AquaMax 微孔洗板机

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使用 EMax plus 微孔读板机(酶标仪)进行 ELISA 工作流程

使用 EMax plus 微孔读板机(酶标仪)和 MultiWash+ 微孔板洗板机进行的 ELISA 工作流程

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