细胞信号传导
细胞信号传导使细胞能够对它们所处的环境做出反应,并与其他细胞进行交流。位于细胞表面的蛋白可以接收来自周围环境的信号,并通过包括信号传导通路在内的一系列蛋白相互作用和生化反应将信息传递到细胞中。多细胞生物依靠广泛的信号传导通路来协调细胞和组织的正常生长、调控和功能。如果细胞之间或细胞内的信号传导紊乱,不适当的细胞反应可导致癌症和其他疾病。
细胞信号传导是各过程的总称,即细胞接收信号、解读信号并相应作出反应。这些信号包括温度、光或电等物理提示与小分子结合细胞表面等化学信号。细胞能处理这些信号,因此可与其他细胞和环境产生相互作用。此外,细胞信号传导是所有生物发生、免疫应答和稳态的基础。这就是神经细胞如何与肌肉沟通促成动作,或身体如何在识别病原体时启动免疫应答。
细胞反应
已经开发了许多工具来测定通过各种信号传导通路发生的细胞反应。G 蛋白偶联受体 (GPCR) 信号传导可以使用从钙通量(可使用荧光染料进行监测)到下游效应物分子变化(通过时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 进行评估)的检测进行研究。荧光分子已被用于揭示在信号传导通路中起关键作用的激酶的活性变化。利用发光反应进行的荧光素酶报告基因检测已成为基础研究和药物发现中研究基因调控和细胞信号传导的一项通用工具。
检测细胞信号和反应可以帮助我们阐明细胞间的相互作用在疾病中的作用。药物发现也大大受益于细胞信号传导测定,因为许多药物会抑制信号传导期间的异常配体-蛋白相互作用。
细胞信号传导应用和测定法
下面,我们介绍了各种可以使用带荧光、TR-FRET、荧光极化和发光检测模式的微孔板读板机运行的细胞信号传导应用。
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钙和 IP-One 检测(GPCR、Gq 偶联)
监测下游钙或环腺苷酸 (cAMP) 可评估通过 G 蛋白偶联受体 (GPCR) 的细胞信号传导。对于 Gq 蛋白偶联受体激活后的钙流,通常在荧光微孔板读板机上使用钙敏感染料对活细胞进行实时监测。这一通路的另一个分支使用 IP1 TR-FRET 检测进行监测。
以下是一些您可能感兴趣的应用说明:
cAMP 检测(GPCR、Gi/Gs 偶联)
监测由腺苷酸环化酶激活产生的第二信使 cAMP 的水平是筛选 Gi/Gs 蛋白偶联受体的激动剂和拮抗剂的一种最常用方法。可使用结合 cAMP 的荧光分子监测 cAMP 水平,这种分子使用荧光读板机即可检测到。一些 cAMP 检测需要其他检测模式,例如时间分辨荧光。
以下是一些您可能感兴趣的应用说明:
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激酶、磷酸酶和磷酸二酯酶
多年来,激酶活性检测均使用放射性同位素或高度特异性抗体进行。Molecular Devices 的专有 IMAP® 技术提供了一种非放射性的均相检测,可用于高通量筛选,且适用于各种激酶、磷酸酶和磷酸二酯酶,无论其底物肽序列如何。
以下是一些您可能感兴趣的应用说明:
神经元钙流
监测胞内钙变化是一种极其有用的技术,可用于研究钙离子对神经元的不同作用。直接测量神经元网络中的动态钙流,可以揭示神经元如何处理细胞外间隙的信号。
此应用说明表明,使用荧光微孔板读板机能够检测原代大鼠皮层神经元中的胞内钙流:
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单/双荧光素酶报告基因检测
报告基因是研究与细胞通路激活相关的基因表达的重要工具。细胞转染一种含报告基因和一段目标序列的质粒,目标序列通常是一个启动子或其他转录调控元件。当启动子被激活时,会表达报告基因并测量其表达水平。
通过以下应用说明了解更多关于荧光素酶报告基因检测的信息:
前沿资源
细胞信号转导的资源
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