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细胞株开发

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细胞株开发

稳定细胞株广泛用于许多重要的应用，包括生物制品（如重组蛋白和单克隆抗体）生产、药物筛选和基因功能研究。开发稳定细胞株的过程通常始于将所需的质粒转染至选定的宿主细胞，一般是 CHO 或 HEK 293 细胞。转染后，研究人员筛选和定量分析高表达的细胞克隆。一旦检测到这些高产细胞株，便进一步对这些细胞和其产生的蛋白质进行验证。

传统上用于细胞株开发的人工筛选方法既费时又费力，因此对高通量自动化解决方案提出了巨大的需求。下面常规的工作流程有助于确定可以帮助您进行研究的系统。

细胞株开发流程：

转染 - 将外源 DNA（编码目标重组蛋白）导入宿主细胞的过程。携带插入其基因组的外源 DNA 且可长时间保持其表达重组蛋白能力的一小群细胞被称为稳转细胞。
抗体筛选/滴度测定 - 从转染后的细胞池中发现和挑选优质克隆。通过定量测定细胞表面目标蛋白或分泌抗体（滴度测定）的表达情况来筛选大的细胞群，将增加发现高亲和力产物或高产细胞株的概率。
单细胞分离和细胞活性 - 必须分离并克隆单个活细胞以确保细胞群的基因相同，从而显著降低表达的异质性。
单克隆性保证 - 当开发用于生物治疗药物的细胞株时，从质量和监管角度来看，确保该细胞株是源于单个祖细胞的单克隆细胞至关重要。单克隆性的记录（治疗细胞株的一个监管指标）通常都是图像形式的，据此可记录单细胞的图像并将其纳入监管文件中。
克隆产量筛选和滴度 - 这是一项测定克隆源性细胞株所产生的重组蛋白或抗体产量的检测。

细胞表面表达筛选

许多在细胞表面表达的蛋白都是用于发现和开发生物医药的靶标。例如，G 蛋白偶联受体 (GPCR) 是最大的细胞表面蛋白类别，并且是大约 40% 现有药物的靶标。从转染后的细胞池中发现和挑选细胞表面GPCR表达增加的高价值克隆可能极具挑战性。ClonePix 2 系统是可筛选大量细胞的一种自动化方法，它增加了发现稀有高亲和力杂交瘤细胞或高产细胞的概率。

细胞活力

细胞株开发就是发现源自单个细胞的克隆，其可稳定高表达目标治疗性蛋白。此过程中分离单个活细胞是关键的第一步。单细胞增殖形成克隆，随后可评估其目标治疗蛋白的产率。单细胞源性克隆的活性和生长率可在 CloneSelect 成像仪和 SpectraMax i3x 微孔板读板机以及成像细胞计数仪上进行表征。

克隆产量筛选和滴度

识别优质克隆的一个重要步骤是测定单细胞来源克隆的表达量。使用传统方法筛选产率费力且耗时，通常包含多个步骤，包括从有限稀释中分离单细胞之后再用 ELISA 进行滴度评估。ClonePix 2 系统将表型选择、单细胞分离和产率筛选合为一个步骤，因此可明显缩短筛选时间并增加候选物数量。

传统克隆方法与 f.sight 的比较

随着细胞株开发法规越来越严格，研究人员将需要进行单细胞克隆并提供细胞株源于某个单细胞的证据（克隆性证据）。在本研究中，我们开展了六组实验以证实 f.sight 和 CSI 相结合的工作流程可在单轮克隆中保证较高的单克隆性。我们还使用 CloneSelect f.sight 单细胞打印机和其他两种公认的传统克隆法（流式细胞术和有限稀释法）比较了两种悬浮 CHO 细胞株的克隆效率。

使用常用于产生单克隆抗体的 CHO 细胞株比较传统克隆方法与 CloneSelect 单细胞打印机 f.sight

单克隆性保证

细胞株开发和单克隆性验证是制备生物制药分子（如单克隆抗体）过程中的关键步骤。在分离稳定表达目标蛋白的单个活细胞后，可建立细胞株。此过程中的一个关键结点是记录单克隆性证据。单克隆性证据通常都是图像形式，据此可生成单细胞图像并将其随附在监管文件中。

单细胞分选

细胞株开发就是发现源自单个细胞的克隆，其可稳定高表达目标治疗性蛋白。此过程的第一步是分离活的单细胞。有限稀释是一种依赖于统计概率的技术，但很耗时。CloneSelect Single-Cell Printer 能够以尽量提高细胞活性的方式来温和分离细胞，同时通过在细胞分配时捕获的 5 张图像系列来提供克隆性的直接证据。