细胞株开发
稳定细胞株广泛用于许多重要的应用,包括生物制品(如重组蛋白和单克隆抗体)生产、药物筛选和基因功能研究。开发稳定细胞株的过程通常始于将所需的质粒转染至选定的宿主细胞,一般是 CHO 或 HEK 293 细胞。转染后,研究人员筛选和定量分析高表达的细胞克隆。一旦检测到这些高产细胞株,便进一步对这些细胞和其产生的蛋白质进行验证。
传统上用于细胞株开发的人工筛选方法既费时又费力,因此对高通量自动化解决方案提出了巨大的需求。下面常规的工作流程有助于确定可以帮助您进行研究的系统。
细胞株开发流程:
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转染 - 将外源 DNA(编码目标重组蛋白)导入宿主细胞的过程。携带插入其基因组的外源 DNA 且可长时间保持其表达重组蛋白能力的一小群细胞被称为稳转细胞。
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抗体筛选/滴度测定 - 从转染后的细胞池中发现和挑选优质克隆。通过定量测定细胞表面目标蛋白或分泌抗体(滴度测定)的表达情况来筛选大的细胞群,将增加发现高亲和力产物或高产细胞株的概率。
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单细胞分离和细胞活性 - 必须分离并克隆单个活细胞以确保细胞群的基因相同,从而显著降低表达的异质性。
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单克隆性保证 - 当开发用于生物治疗药物的细胞株时,从质量和监管角度来看,确保该细胞株是源于单个祖细胞的单克隆细胞至关重要。单克隆性的记录(治疗细胞株的一个监管指标)通常都是图像形式的,据此可记录单细胞的图像并将其纳入监管文件中。
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克隆产量筛选和滴度 - 这是一项测定克隆源性细胞株所产生的重组蛋白或抗体产量的检测。
开发细胞株的应用和方法
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细胞表面表达筛选
许多在细胞表面表达的蛋白都是用于发现和开发生物医药的靶标。例如,G 蛋白偶联受体 (GPCR) 是最大的细胞表面蛋白类别,并且是大约 40% 现有药物的靶标。从转染后的细胞池中发现和挑选细胞表面GPCR表达增加的高价值克隆可能极具挑战性。ClonePix 2 系统是可筛选大量细胞的一种自动化方法,它增加了发现稀有高亲和力杂交瘤细胞或高产细胞的概率。
细胞活力
细胞株开发就是发现源自单个细胞的克隆,其可稳定高表达目标治疗性蛋白。此过程中分离单个活细胞是关键的第一步。单细胞增殖形成克隆,随后可评估其目标治疗蛋白的产率。单细胞源性克隆的活性和生长率可在 CloneSelect 成像仪和 SpectraMax i3x 微孔板读板机以及成像细胞计数仪上进行表征。
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克隆产量筛选和滴度
识别优质克隆的一个重要步骤是测定单细胞来源克隆的表达量。使用传统方法筛选产率费力且耗时,通常包含多个步骤,包括从有限稀释中分离单细胞之后再用 ELISA 进行滴度评估。ClonePix 2 系统将表型选择、单细胞分离和产率筛选合为一个步骤,因此可明显缩短筛选时间并增加候选物数量。
传统克隆方法与 f.sight 的比较
随着细胞株开发法规越来越严格,研究人员将需要进行单细胞克隆并提供细胞株源于某个单细胞的证据(克隆性证据)。在本研究中,我们开展了六组实验以证实 f.sight 和 CSI 相结合的工作流程可在单轮克隆中保证较高的单克隆性。我们还使用 CloneSelect f.sight 单细胞打印机和其他两种公认的传统克隆法(流式细胞术和有限稀释法)比较了两种悬浮 CHO 细胞株的克隆效率。
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单克隆性保证
细胞株开发和单克隆性验证是制备生物制药分子(如单克隆抗体)过程中的关键步骤。在分离稳定表达目标蛋白的单个活细胞后,可建立细胞株。此过程中的一个关键结点是记录单克隆性证据。单克隆性证据通常都是图像形式,据此可生成单细胞图像并将其随附在监管文件中。
单细胞分选
细胞株开发就是发现源自单个细胞的克隆,其可稳定高表达目标治疗性蛋白。此过程的第一步是分离活的单细胞。有限稀释是一种依赖于统计概率的技术,但很耗时。CloneSelect Single-Cell Printer 能够以尽量提高细胞活性的方式来温和分离细胞,同时通过在细胞分配时捕获的 5 张图像系列来提供克隆性的直接证据。
细胞株开发的资源
应用文章
A microfluidics-based, single cell printing and microplate imaging workflow optimized for efficiency, viability and monoclonality report generation
基于微流控的单细胞分离与孔板成像组合提高细胞株筛选的效率
在该应用文章中,我们展示了一个结合单细胞接种和单克隆性验证的整合工作流程。我们联合使用 SCP 和 CSI 来将单细胞沉积在…
产品单页
CloneSelect Single-Cell Printer Series
CloneSelect 高通量单细胞分离系统
CloneSelect™ Single-Cell Printer™ 系列采用类似喷墨打印机的一次性专有单向分离槽温和高效地接种单细胞。
彩页
CloneSelect Imager Monoclonality Report Feature
CloneSelect Imager 细胞生长分析系统单克隆性报告功能
在细胞株开发过程中提供单克隆性的图像证明并不像导出单细胞图像一样简单。例如,整个......的高分辨率图像
应用文章
Measuring cell viability and cytotoxicity with the EarlyTox Cell Integrity Kit
通过 EarlyTox 细胞完整性试剂盒测量细胞活性和细胞毒性
EarlyTox™ 细胞完整性试剂盒是一组经优化的试剂,可简化对活细胞和死细胞的识别。它可用于测定不同处理对…
应用文章
Confident assurance of clonality using calcein AM with minimal effect on viability
使用对活性影响小的 Calcein AM 来确证单克隆性
开发可表达特定目标蛋白的细胞株对于产生单克隆抗体等生物制药分子来说至关重要。建立一个细胞…
科学海报
Rapid Screening and Selection of Stable High Producing Clones
快速筛选和选择稳定高产克隆
筛选稳定高产的细胞株是开发和生产新蛋白制剂的关键限速步骤。
科学海报
Rapid Monoclonality Verification Methods to Boost Cell Line Development
快速单克隆验证方法促进细胞株开发
在此,我们提出一种使用 CellTracker Green CMDFA 来识别单克隆 CHO-S 细胞的荧光方法。
应用文章
Rapid and efficient selection of high producing mammalian cells secreting non-mAb proteins
快速且高效地选择可分泌非单克隆抗体蛋白的高产哺乳动物细胞
ClonePix 系统中的技术消除了对连续稀释或细胞分选技术的需求。它允许高分泌细胞的单克隆群建立在…
应用文章
Automated Optimization of IgG Production in CHO Cells
自动优化 CHO 细胞中的 IgG 生产
长期以来,单克隆抗体一直是细胞和分子检测的重要工具,并且已引入临床,作为小分子转换为生物治疗的一部分…
应用文章
Confident Identification of Monoclonal CHO-S Cells Grown in Semi-Solid Media using the CloneSelect Imager
使用 CloneSelect Imager 细胞生长分析系统可靠检测半固相培养基中产生的单克隆 CHO-S 细胞
生物药品获批的监管标准不断变化。单克隆性的数字记录是生物细胞株的监管指标之一,具有......
应用文章
Confluence and growth curve generation on the CloneSelect Imager
在 CloneSelect Imager 细胞生长分析系统上生成汇合度和生长曲线
监测细胞增殖的能力越来越重要,特别是在体外细胞株被广泛用作模型系统的情况下。增殖率可用于…
应用文章
Rapid automated selection of mammalian cell colonies by cell surface protein expression
基于细胞膜蛋白表达量快速自动筛选哺乳动物细胞克隆
根据表面蛋白表达来选择细胞的能力在建立表达下游表型分型/基因分型的目标受体的细胞株方面非常有用…
应用文章
Rapid selection and development of GPCR expressing mammalian cell lines using novel ClonePix Technology
使用新型 ClonePix 技术快速选择和开发表达 GPCR 的哺乳动物细胞株
就细胞株开发而言,从转染后的众多细胞中发现和选择高表达 GPCR 克隆非常具有挑战性。ClonePix 2 系统中的技术…
应用文章
Enhanced development of virus-specific hybridomas using ClonePix and CloneSelect Imager Technologies
使用 ClonePix 和 CloneSelect Imager技术促进病毒特异性杂交瘤细胞的开发
ClonePix 系统用于从亲代杂交瘤物质中高通量地筛选数百种亚克隆的细胞克隆(一直以来,亲代细胞株产量均不到 1 mg/…)
应用文章
Luminescent cell viability and cytotoxicity assays on the SpectraMax i3x Multi-Mode Microplate Reader
在 SpectraMax i3x 多功能酶标仪(微孔板读板机)上进行发光法细胞活性和细胞毒性测定
Promega 的 CellTiter-Glo 检测会使用荧光素酶,并需要 ATP 以产生光。检测中产生的发光信号取决于…中 ATP 的量
彩页
SpectraMax i3x Multi-Mode Detection Platform
SpectraMax i3x 多功能检测平台
SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机可测定光谱吸光度、荧光和发光,且附加适用于蛋白印迹检测、成像......的模块化升级功能
视频和网络研讨会

选择高产分泌非单克隆抗体蛋白的哺乳动物细胞工作流程 - SynBioBeta 闪电演讲

细胞株开发的多种不同工作流程