细胞计数仪

细胞计数仪:THP-1 细胞

人单核细胞系 THP-1 于 40 多年前来源于一例急性单核细胞白血病患者的血液,现在广泛用于单核细胞和巨噬细胞功能研究以及白血病研究。正常情况下,THP-1 以悬浮物的形式生长,但它们会被诱导分化成贴壁巨噬样细胞,表达 IL-8 和其他标志物,因此可作为一种分化模型系统。

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图 1:未分化 THP-1 细胞的 StainFree 和荧光细胞核计数

在接种后一天,按每孔 156-20,000 个细胞的密度范围接种的 THP-1 细胞使用 StainFree 技术进行计数(蓝色圆圈),或在用 EarlyTox 活细胞红色染料染色后对胞核进行计数(红色圆圈)。在所有的细胞密度下,使用这两种方法获得的细胞计数只有 5% 或更少的差异。

图 2:在 MiniMax 细胞计数仪上对未分化的 THP-1 细胞进行成像

A. THP-1 细胞用 EarlyTox 活细胞红色染料染色。B. 紫色对象掩膜为 SoftMax Pro 软件在红色荧光成像通道中识别出的细胞。C. 在 TL 通道中对细胞进行成像。D. 在 TL 通道中通过 StainFree 分析识别细胞。

图 3:THP-1 分化时程

将 THP-1 细胞按 20,000 个细胞/孔的密度接种到 96 孔黑壁透明底板上。它们用 25 ng/µL PMA 或 DMSO 对照处理。在第 0 天、添加后第 1 天和添加后第 2 天对细胞进行成像。黄色箭头表示有贴壁、扁平形态的分化细胞。

图 4:THP-1 细胞增殖

使用 StainFree 技术测量经 PMA 或 DMSO 处理的对照细胞的细胞增殖。PMA 处理会使细胞增殖停止,但对照细胞会继续分裂。

图 5:IL-8 ELISA

通过 ELISA 测量经 PMA 和 DMSO 处理的 THP-1 细胞中的 IL-8 浓度。细胞按每孔 24,000 个细胞接种,开始处理后 48 小时收集上清液进行测定。使用 SpectraMax i3 微孔板读板机检测基于吸光度的 IL-8 ELISA。

提示:

对于未分化的 THP-1 细胞等悬浮细胞,您可以使用更短的暴露时间,以较大程度减少细胞浮动产生的模糊问题。SpectraMax MiniMax 300 成像细胞计数仪能够很快地切换波长,以较大程度减少图像之间发生的细胞移动程度,从而使不同通道拍摄的图像具有更好的重叠效果。“CellsC”预定义 TL 图像分析设置对圆形形态的悬浮细胞很有用,而“CellsA”则能够更加准确地识别更加扁平的分化细胞。

THP-1 细胞分析工具包

成像和细胞计数仪器设置

参数
未分化 THP-1
分化 THP-1
光学配置
SpectraMax MiniMax 300 细胞成像系统
读板模式
成像
读板类型
终点法
波长设置
透射光、713
图像采集设置
曝光:2 ms (TL)、17 ms (713)
曝光:6 ms (TL)
图像分析设置

分析类型:离散对象分析

发现对象所需波长:TL 或 713

识别对象
预定义设置:CellsC
预定义设置:CellsA

关于 StainFree 细胞检测技术

细胞成像检测通常需要借助于荧光染料对细胞标记,但会对活细胞产生毒性,或者仅可用于固定的细胞中使用。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可让研究者定量监测细胞增殖和健康状况,无需进行那些可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。

具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3 多功能微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术,让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定,无需使用可与 DNA 相结合的细胞核染色,如 DAPI,或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。