细胞计数仪

细胞计数仪:RBL 细胞

大鼠嗜碱细胞白血病 (RBL) 细胞系是在二十世纪七十年代确定的,为研究人员提供了一个便利(如有缺陷)的模型系统来研究难以获得的肥大细胞。RBL-2H3 细胞从一种原始 RBL 细胞系亚克隆而来,它已用来研究肥大细胞中和分泌相关的生物化学通路。一些 RBL 细胞系以悬浮培养形式生长,其他细胞则贴壁培养。因为在不同的生长条件下,甚至在相同的培养物中,这些细胞的形态会不同,所以能够创建自定义 StainFree 分析设置对于确保准确的细胞计数是极其有用的。

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图 1:StainFree 细胞计数

RBL-1 细胞使用 SpectraMax i3 MiniMax 300 成像细胞计数仪进行成像,使用自定义、用户定义的分析设置识别细胞。左图显示的是原始透射光图像,右图显示的是同一个图像,但有紫色标记,表明软件检测到的细胞。

图 2:StainFree 细胞计数 vs 荧光细胞核计数

按每孔 156-20,000 个细胞的密度范围接种的 RBL-1 细胞使用 StainFree 技术进行计数(蓝点),或使用 EarlyTox™ 活细胞红色染料染色,并对红色荧光细胞核进行计数(红点)。在整个细胞密度范围内,使用两种方法获得的细胞计数结果基本吻合。测量用户定义的感兴趣区域 (ROI) 中的细胞数量。

图 3:在 FlexStation 3 多功能微孔板读板机上进行 FLIPR 钙 6 测定

RBL-2H3 细胞按 30,000 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板中并培养过夜。第二天,去除生长培养基,向孔中添加 FLIPR® 钙 6 测定染料和丙磺舒,细胞孵育 2 小时。随后在 FlexStation® 3 多功能微孔板读板机上进行荧光动力学检测。机载移液器会将激动剂 ADP 滴入检测孔中,而读板机也会同时从孔底测量指示钙流的荧光信号。

图 4: 在 FlexStation 3 多功能微孔板读板机上进行 Fura-2 QBT 钙测定

RBL-2H3 细胞按 30,000 个细胞/孔的密度接种在 96 孔板中并培养过夜。第二天,在去除生长培养基后,上样 Fura-2 QBT™ 染料,维持 60 分钟。对于 IC50 研究,在测定前向细胞中添加抑制剂 YM-58483,维持 45 分钟。随后在 FlexStation 3 多功能微孔板读板机上进行荧光动力学检测。机载移液器按 EC80 浓度(抑制剂检测,蓝点)或以滴度系列(红点)将 CaCl2 滴入孔中。读板机会同时从孔底测量指示钙流的荧光信号。

提示:

RBL 细胞的悬浮培养物中经常有一些贴壁细胞,因此 SoftMax Pro 软件中用户创建的分析设置对于“训练”该软件仅识别有悬浮类型形态的细胞,并排除贴壁细胞非常有用。对于贴壁培养物(形态可能各异),用户创建的分析设置能较大程度识别所有细胞,无论形态如何。

RBL 细胞分析工具包

成像和细胞计数仪器设置

参数
细胞计数设置
光学配置
SpectraMax MiniMax 300 细胞成像系统
读板模式
成像
读板类型
终点法
波长设置
透射光
图像采集设置

曝光:7 ms

焦点调节:20µm

图像分析设置

分析类型:离散对象分析

识别对象所需波长:TL

识别对象
设置:创建新设置

关于 StainFree 细胞检测技术

细胞成像检测通常需要借助于荧光染料对细胞标记,但会对活细胞产生毒性,或者仅可用于固定的细胞中使用。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可让研究者定量监测细胞增殖和健康状况,无需进行那些可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。

具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3 多功能微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术,让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定,无需使用可与 DNA 相结合的细胞核染色,如 DAPI,或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。