NIH3T3 细胞系是科学家 George Todardo 和 Howard Green 于 1963 年确定的，它源于小鼠胚胎成纤维细胞。这些细胞自发永生，并以其培养实验步骤命名，即“3 天传代，接种 3 x 105 个细胞”。目前，标准的成纤维细胞系被认为是极好的转染宿主，也是诱导干细胞多能性实验的模型。在人胚胎干细胞研究中，它们也可用作饲养细胞，常用于培养角化细胞，因为 NIH3T3 的生长因子有利于角化细胞的生长。
NIH3T3 的细长结构和多变的细胞大小为图像分析带来了诸多困难。但使用 StainFree 技术，我们能够非常准确地对这些形状不规则的细胞进行计数。
Download StainFree Cell Detection Application Note 无荧光染料的非标记细胞成像分析技术
图 1. NIH3T3 细胞的 StainFree 分析
NIH3T3 细胞使用 SpectraMax MiniMax 300 成像细胞计数仪进行成像，并使用预定义的 “CellsB” 分析设置检测细胞。左图显示的是原始透射光图像，右图显示的是同一个图像，但有紫色标记，表明软件检测到的细胞。
图 2：NIH3T3 细胞的细胞计数
将 NIH3T3 细胞按 1:2 稀释系列接种到 96 孔板上。细胞固定后，使用胞核染料染色。染色后，使用 SpectraMax MiniMax 300 成像细胞计数仪对细胞进行计数，以细胞核红色染色（红色曲线）或 StainFree™ 细胞检测技术（蓝色曲线）为细胞识别基础。两种计数方法得出的结果几乎相同，而且两种曲线都 r2 > 0.99。
图 3. NIH3T3 细胞染色
NIH3T3 细胞用 AlexaFluor 488-phalloidin 和红色细胞核染料染色。在 SpectraMax MiniMax 300 成像细胞计数仪上对细胞进行成像。
提示：
对于很多 NIH3T3 培养物，你可以使用 SoftMax Pro 软件中的其中一种预定义设置轻松地对细胞进行计数。可以使用 “CellsB” 或 “CellsD” 设置。或者，你可以使用绘制工具来创建一种适合你特定细胞的新自定义设置。为了避免细胞的不规则形状和聚集倾向带来的问题，你可以在目标细胞的轮廓内轻轻绘制。为了防止在这些细胞上较长的过程导致的潜在计数过度问题，只需用背景工具在这些过程上绘制，即可防止将其作为单独的细胞进行计数。
NIH3T3 细胞分析工具包
- SpectraMax® i3 多功能微孔板检测平台
- SpectraMax® MiniMax™ 300 成像细胞计数仪
- SoftMax® Pro 软件
仪器设置
| 参数 | 细胞计数设置 |
| 光学配置 | SpectraMax MiniMax 300 细胞成像系统 |
| 读板模式 | 成像 |
| 读板类型 | 终点法 |
| 波长设置 | 透射光 |
| 图像采集设置 | 曝光：3 ms |
| 图像分析设置 | 分析类型：离散对象分析 |
| 识别对象 | 设置：可以使用 CellsB 或 CellsD 预定义设置，或自定义设置 |
关于 StainFree 细胞检测技术
细胞成像检测通常需要借助于荧光染料对细胞标记，但会对活细胞产生毒性，或者仅可用于固定的细胞中使用。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可让研究者定量监测细胞增殖和健康状况，无需进行那些可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。
具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3 多功能微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术，让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定，无需使用可与 DNA 相结合的细胞核染色，如 DAPI，或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。