细胞计数仪

细胞计数仪:A431 细胞

表皮样癌细胞系 A431 表达异常高水平的表皮生长因子受体 (EGFR),它是研究 EGFR 介导的信号转导的一个有用模型,其中 EGFR 调节哺乳动物细胞的生长、存活、增殖和分化。A431 细胞来源于一例 85 岁女性老年患者的表皮,并由 D. J. Giard 等人确定,经证明是检测细胞周期、凋亡和癌症的一个重要模型系统。

查看 StainFree 细胞检测网络研讨会

下载免染细胞检测应用说明

下载电子书:专业的细胞计数

图 1:使用 SpectraMax MiniMax 细胞计数仪获得的图像

A431 细胞用 EarlyTox™ 活细胞红色染料染色,然后使用 SpectraMax MiniMax 细胞计数器进行成像。使用用户定义自定义设置来检测细胞。顶部:叠加的透射光和红色荧光图像;底部:使用 StainFree 分析软件识别的细胞(紫色掩膜为软件识别的细胞)。

图 2:StainFree 细胞计数 vs 荧光细胞计数

A431 细胞的接种密度范围为每孔 156-20,000 个细胞,胞核用 EarlyTox 活细胞红色染料染色。每孔获得 4 个位置的图像,并选择孔中间的目标区域进行分析。随后使用 StainFree 方法(蓝色圆圈)或对红色荧光细胞核计数(红色圆圈)来进行细胞计数。

图 3:EarlyTox Caspase-3/7 NucView 488 检测

A431 细胞用梯度稀释的 staurosporine(红色图)、camptothecin(绿色图)和 etoposide(蓝色图)处理 24 小时,然后使用 EarlyTox™ Caspase-3/7 NucView 488 Assay Kit 进行凋亡检测。表达 caspase-3/7 的细胞用绿色荧光染色并进行成像,同时使用 SpectraMax MiniMax 细胞计数器计数。使用 SoftMax Pro 软件将结果绘制为凋亡细胞计数对比化合物浓度的图。

提示:

A431 细胞为上皮细胞形态,趋于成簇生长,因此在计数上有点难度。要进行 StainFree 计数,使用“创建新设置”并使用黄色绘图工具绘制出细胞轮廓,不要超出胞棱。使用蓝色绘图工具标明非细胞区域以及任何伪迹。

A431 细胞分析工具包

参数
细胞计数设置
光学配置
SpectraMax MiniMax 300 细胞成像系统
读板模式
成像
读板类型
终点法
波长设置

透射光 (TL)

713 nm(红色荧光)

图像采集设置

TL 曝光:7 ms

TL 对焦调节:0µm

713 曝光:12 ms

713 对焦调节:20µm

图像分析设置

分析类型:离散对象分析

识别对象所需波长:TL (StainFree) 或 713(红色细胞核)

识别对象

TL:创建新设置(自定义)

713:设置尺寸和密度:尺寸 = 10-30 µm,密度大于背景 = 70

关于 StainFree 细胞检测技术

细胞成像检测通常需要借助于荧光染料对细胞标记,但会对活细胞产生毒性,或者仅可用于固定的细胞中使用。用于分析细胞计数和细胞融合度的无标记方法可让研究者定量监测细胞增殖和健康状况,无需进行那些可能会影响细胞活力且耗时的工作流程。

具备 MiniMax 300 成像细胞仪的 SpectraMax i3/i3x 多模式微孔板平台采用较独特且StainFree 细胞检测技术,让您能够进行细胞增殖、毒性和其他测定,无需使用可与 DNA 相结合的胞核染色,如 DAPI,或从长远来看确实会对细胞产生毒性的活细胞染料。