微孔板读板机解决方案

我需要单功能读板机还是多功能读板机？

如果您只进行一种读取（只是吸光度、荧光或发光），那么单功能读板机更适合您。但是，如果您认为您的需求可能会发生变化，或者您正在进行多个应用且读取类型不同，那么多功能读板机将是您的最佳选择。

哪些光源可用以及我应该选择哪种？

有三种光源可用：闪灯、LED 和激光。

氙闪灯可在非常广泛的光波长 (200-1000nm) 范围内提供相当大的强度。一般来说，它在可见光范围内会更有效，但也可用于紫外光 (UV) 和近红外光范围。

LED 在 375 至 1000nm 光谱范围内可用作光源。大多数 LED 的带宽较窄，在 20 至 50nm 之间，并且专门用于特定范围。它们产生的光强度比大多数氙闪灯都高，因此可以为某些测定提供更高的灵敏度。LED 的使用寿命也很长。

激光的强度要高得多，且可用于 AlphaScreen 等特定应用，在这些应用中，您需要特定波长时具有的大量能量。

通常，LED 的性能优于闪灯。然而，SpectraMax® iD5 多功能微孔板读板机（具有高性能 [高强度] 闪灯）等新一代仪器具备与 LED 读板机类似的性能。如果您不想在光源之间进行选择，可以使用类似于我们的 SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机这样的系统，该系统提供这三种光源，因此您可以为您的应用选择最佳光源。

我是否需要滤光片或单色仪？

单色仪和滤光片是微孔板读板机设计中不可或缺的两种不同波长选择技术。

在基于滤光片的仪器中，具有特定波长的滤光片被整合到激发和发射光学器件中。此外，二色镜（或半透明滤光片）等分束器将激发光传递到样品中，并让发射光能够通过发射滤光片，从而检测到信号。这种设计可将信号损耗降至最低，并有效分离激发和发射波长。

基于单色仪的仪器设计更为复杂，且不同仪器之间的设计可能有所不同。单色仪通常由入口槽口、棱镜或全息光栅等分散元件以及出口槽口组成。单色仪用于过滤激发和发射光。衍射光栅将白光分离成光谱，以便出口槽口隔离特定波长的光，从而激发样品。在出口槽口内，旋转的分散元件让人们可以选择所需的波长。基于滤光片和单色仪的微孔板读板机均有各自的优势。

由于设计更简单（与单色仪相比），基于滤光片的仪器所用的组件更便宜。专用滤光片可将信号损耗降至最低，并有效分离激发和发射波长，使其在某些应用中更为灵敏。您可能需要拥有常用滤光片的初始存货。随着时间的推移，您可能需要购买额外的滤光片，以满足不断变化的需求。生物发光共振能量转移 (BRET)、荧光极化和时间分辨荧光共振能量转移 (TR-FRET) 等应用通常需要滤光片才能达到必要的灵敏度。另一方面，基于单色仪的仪器非常方便灵活，可满足许多应用的灵敏度要求，并且无需您持有应用特定的滤光片存货。单色仪还提供光谱扫描功能，用于新染料特性鉴定和光谱变化研究。

您应该选择哪一种？如果您总是使用相同的应用或相同的波长，那么基于滤光片的仪器可能更便宜。通常，在同类仪器中，滤光片的灵敏度高于单色仪。但单色仪的灵敏度足以用于大多数测定，并且与基于滤光片的仪器相比，它们具有更高的灵活性和便利性。幸运的是，MOLECULAR DEVICES 的 SpectraMax i3x 和 iD5 读板机可提供两全其美的办法。这些系统是混合系统，让您可以在滤光片或单色仪之间进行选择，从而获得最佳的测定性能。

我需要宽带宽还是窄带宽？

当荧光基团的激发和发射峰接近时（斯托克斯位移狭小），窄带宽可提高分辨率，建议用于荧光测量。它可以最大限度地减少不必要的光测量量，从而最大限度地降低背景水平，提高信号测量的特异性。

增加带宽可以让更多光进入仪器的光路，从而提高信噪比和灵敏度。较宽的激发带宽可增加激发样品的光量，而对于发射，则能捕获范围更宽的发射信号。

为微孔板读板机选择哪种光谱带宽将取决于多个因素。您要用于哪些应用？您是否采取两种读取模式，如 FRET 或 TR-FRET（如 HTRF®）？您正在使用哪些荧光基团？激发峰和发射峰的形状是什么？您的测定有多少背景？一般情况下，窄带宽最适合斯托克斯位移狭小的荧光基团，以及在波长彼此接近时进行多次荧光测量。更宽的带宽最适合宽激发和发射峰，因为它们将会增加测定的灵敏度。但是，您必须小心监控您的测定背景，因为更宽的带宽可以检测到更多的背景荧光，从而降低信噪比。

幸运的是，MOLECULAR DEVICES 提供的系统带宽可变，可同时兼具特异性和灵敏度，并且适用于测定优化，因此您无需作出选择。SpectraMax i3x 读板机具有可变的荧光和发光带宽，您可以选择 9nm 或 15nm 进行激发，也可以选择 15nm 或 25nm 进行发射。在发光模式下，如果要为读取指定一个波长，可以选择 15nm 或 25nm 的发射带宽。

我需要注射器吗？

如果您正在进行双荧光素酶测定或荧光钙 (GPCR) 测定等快速动力学测定，则需要注射器。快速动力学测定的特点是在向孔中添加化合物或其他试剂后会快速发生反应。这种反应速度以及产生的信号快速下降意味着用于进行这些测定的仪器需要在添加试剂之时或之后不久对孔进行读取，以便捕获所有信号。

我需要顶部读取还是底部读取仪器？

如果您只进行将测定材料均匀分布于整个孔中（同质）的实验，那么顶部读取就足够了。但是，如果您希望进行基于细胞的实验，相关信号位于孔底，甚至可能被淬灭剂或掩蔽染料从上方遮蔽，那么您需要一个底部读取微孔板读板机。